摘要
本文以雪菊(Coreopsis tinctoria Nutt)糖聚物为研究对象,对其进行提取、分离纯化、结构鉴定和药理活性研究. 首先采用热水和碱液对雪菊中的糖聚物进行提取,对水提液进行分级醇沉,得到三个部位的粗糖聚物P50、P70、P90,碱提取液醇沉得到粗糖聚物PB.采用苯酚-硫酸法测得四个部位糖聚物的糖含量分别为:66.60%、54.41%、80.78%、50.68%.将溶解性较好且糖含量高的50和70部位粗糖聚物进行脱蛋白、透析,然后用DEAE-Cellulose 52柱进行分离,再用Sephacryl S-100或Sephadex G-75进一步纯化,得到五个糖聚物CT50-2、CT70-1、CT70-1A、CT70-1B和CT70-3.采用高效凝胶渗透色谱法和比旋光度进行纯度验证,结果表明它们都为均一糖聚物,且比旋光度[α]20D分别是-12°、-45°、-9°、-37°、-20°.CT50-2、CT70-1和CT70-3相对分子量经高效凝胶渗透色谱法计算分别是10012、2100 Da和1247 Da,CT70-1A和CT70-1B经MALDI-TOF-MS测得的分子量分别是1221Da和1318 Da.经单糖组成、红外光谱、甲基化/GC-MS和核磁共振图谱分析等方法得到五个糖聚物的一级结构,结果表明, CT50-2含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖5种单糖,包括 →α-D-Glcp-(1→ 、 →6)-α-D-Glcp-(1→ 、 α-L-Araf-(1→ 、→2)-α-L-Araf-(1→ 、 →3)-α-L-Rhap-(1→ 、 →6)-β-D-Galp(1 → 和→3,6)-β-D-Manp-(1→七种连接残基;CT70-1由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和果糖等6种单糖组成,包括→1)-α-D-Glcp、→4)-Glcp-α-D-(1→ 、 →1)-α-L-Araf 、 →5)-α-L-Araf-(1→ 、→6)-β-D-Galp-(1→、→3)-α-L-Rhap-(1→、→3,6)-β-D-Manp-(1→、→3)-β-D-Manp-(1→、→,6)-β-D-Manp-(1→和→2,6)-β-D-Fruf-(1→十种连接残基;而CT70-1A、CT70-1B和CT70-3均由葡萄糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其中, CT70-1A含有α-D-Glcp-(1→、→6)α-D-Glc-(1→ 、 →2)-α-L-Araf-(1→ 、 →6)-β-D-Galp-(1→ 和→3,6)-β-D-Manp-(1→五种连接残基, CT70-1B含有α-D-Glcp-(1→、→2,3 , 6)-α-D-Glcp-(1→ 、 →2)-α-L-Araf-(1→ 、 α-L-Araf-(1→ 、→6)-β-D-Galp-(1→和→3,6)-β-D-Manp-(1→六种连接残基,CT70-3含有→1)-α-D-Glcp、→4)-α-D-Glcp-(1→、→1)-α-L-Araf、→6)-β-D-Galp-(1→和→3,6)-β-D-Manp-(1→五种连接残基.扫描电镜结果表明CT70-1不规则的形状,表面分布着细小不均匀的颗粒,CT70-3为不规则碎片,圆二色谱结果表明CT70-1和CT70-3均不含三股螺旋结构.这五个结构均未见报道. 考察各糖聚物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性,探讨雪菊糖聚物的降血糖活性.结果表明各糖聚物对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶均有不同程度的抑制作用,CT50-2、CT70-1、CT70-1A、CT70-1B和CT70-3对α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC50分别是1.79± 0.10、3.00± 0.17、2.14± 0.10、2.12± 0.06和4.89±0.02mM;CT50-2、CT70-1、CT70-1A、CT70-1B和CT70-3对α-淀粉酶抑制活性的IC50分别是1.80± 0.10、2.79± 0.02、2.77± 0.10、2.75± 0.06和3.35± 0.03mM.检测雪菊糖聚物对RAW264.7细胞活力及产生NO量的影响,结果表明CT70-1能显著性抑制RAW264.7细胞产生NO的量,且IC50为0.07 mM.检测雪菊糖聚物对BV2活力及产生NO量的影响,结果表明CT70-1、CT70-1A、CT70-1B和CT70-3均能抑制BV2细胞产生NO,IC50值分别是0.12、0.23、0.24和0.27 mM,说明雪菊糖聚物CT70-1、CT70-1A、CT70-1B和CT70-3可通过抑制BV2细胞活性来发挥抗神经炎的作用.
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