摘要
背景 细菌脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌中细胞壁的有毒成分，广泛存在于人和动物的消化道中，母体孕期暴露LPS易导致宫内生长受限（IUGR）等不良妊娠结局。法尼醇X受体（Farnesoid X,FXR）是一种核受体，在体内胆汁酸平衡调节中起重要作用，在人类和啮齿动物胎盘中都有表达。最近有研究表明，FXR具有抗炎作用。奥贝胆酸（Obeticholic acid，OCA）是一种合成的FXR受体激动剂，目前正处在对非酒精性脂肪肝炎治疗的二期临床试验当中。 目的 本次研究目的在于探明奥贝胆酸（OCA） 是否能保护细菌脂多糖（LPS）诱发的宫内生长受限（IUGR）及胎鼠死亡，并初步阐明其机制。 方法 本次研究主要包括以下两个实验。实验一：为了研究OCA预处理对LPS诱发的死胎和IUGR的影响，研究将48只ICR小鼠在受孕第13（GD13）天按体重随机平均分为四组，LPS和OCA+LPS组于GD15到GD 17天每天通过腹腔注射给予100μg/kg的LPS。OCA和OCA+LPS组孕鼠GD13至GD17天每天给予5mg/kg的OCA灌胃处理。所有孕鼠于孕18天（GD18）取材，呼吸麻醉后摘除眼球采集母鼠血液，称量记录子宫连胎重。记录孕鼠子代每窝的活胎数目，死胎数目和吸收胎数量。子代活胎记录测量身长和体重。 实验二：为了研究OCA预处理对LPS诱导炎症的介导的IUGR和死胎的影响，将ICR小鼠在受孕第13（GD13）天按体重随机平均分为6组，OCA和OCA+LPS组孕鼠GD13至GD15天每天给予5mg/kg的OCA灌胃处理。LPS和OCA+LPS组于GD15给予100μg/kg的LPS腹腔注射处理，LPS处理后分别于1小时（OCA+LPS1h）和6小时（OCA+LPS6h）取材。收集母体血清和胎鼠羊水以检测TNF-α和IL-10水平。收集胎盘用于实时RT-PCR和免疫印迹分析。收集一些胎盘用于免疫组织化学分析。 结果 从动物模型的结果来看，OCA本身没有提高胎鼠的死亡率，LPS处理组12只孕鼠每窝都有死胎的发生。与单纯LPS组相比，OCA预处理使每窝胎鼠死亡数从3.3降到0.4，同时OCA预处理使胎鼠体重从1.15 g增加到1.26 g。OCA预处理LPS组IUGR的发生率为80％，而OCA+LPS组的IUGR发生率降至40％以下。结果显示OCA预处理减轻了LPS诱导的IUGR胎儿死亡的发生率。OCA处理后FXR蛋白由胎盘迷路层的血窦型滋养巨细胞的胞浆中大量转位入核，相关靶基因水平上调或下调，提示OCA激活了胎盘FXR信号。OCA预处理抑制LPS诱发的母体血清和羊水中的TNF-α的分泌，抑制LPS诱导的促炎细胞因子和趋化因子上调。进一步分析孕鼠血清羊水中抗炎因子IL-10的水平，结果显示OCA处理组的孕鼠母体血清，羊水和胎盘中抗炎细胞因子IL-10水平升高。检测炎症相关NF-κB信号，结果显示，LPS处理后胎盘IκB的蛋白水平显著降低，OCA预处理减弱了LPS诱导的胎盘IκB的磷酸化。LPS处理后胎盘细胞核NF-κB p65和p50亚基的蛋白水平显著增加。免疫组织化学实验结果显示，OCA预处理显著减弱了胎盘迷路层的血窦型滋养巨细胞中LPS诱发的NF-κB p65和p50亚基的核转位。综上实验结果显示，OCA预处理抑制LPS诱导的胎盘NF-κB信号的活化。 结论 OCA可能通过激活FXR信号保护LPS诱导的IUGR和胎鼠死亡。
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