摘要
目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是一类造血干细胞异常的克隆性恶性疾病.化疗和造血干细胞移植是其主要的治疗手段,但化疗易出现多药耐药(Multidrug resistance,MDR)形成难治性和复发性AML[1].多药耐药的发生机制主要是DNA甲基化造成的多药耐药基因MDR1及其产物P糖蛋白(P170)过度表达[2，3],将药物泵出胞外降低胞内化疗药物浓度,产生多药耐药.据不完全统计,白血病患者的耐药发生率约30%[4].随着对AML的深入研究发现,大多AML患者存在基因异常甲基化[5]. 地西他滨（decitabine，DAC )是一种 DNA 甲基化转移酶（DNA methyltransferases，DNMTs)抑制剂,作为针对细胞核靶点的靶向药物,通过与DNMT共价结合,不可逆地抑制DNMT,引起DNA低甲基化、激活沉默的抑癌基因,使细胞恢复正常终末分化、衰老、凋亡状态.地西他滨对骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome，MDS )和AML的治疗效果,相比于一线治疗,低剂量DAC虽然缓解率较低,但存活率比未使用地西他滨的患者都有明显升高[6].本体外实验提示,地西他滨可通过抑制MDR1基因表达和P170蛋白活性而促进耐药白血病细胞凋亡和抑制细胞增殖. 方法:实验随机分组:未加药空白对照组,单药地西他滨组，AA (阿糖胞苷+阿克拉霉素)组,地西他滨联合AA组,作用于K562细胞、K562/ADR细胞、原发耐药的AML原代细胞.检测各种细胞的增殖、凋亡率及MDR1基因和P170蛋白表达水平.每组试验重复3次. 结果: 1.CCK-8法检测不同浓度DAC及有/无AA作用于K562细胞、K562/ADR细胞、原发耐药的AML原代细胞,随药物浓度增高及时间延长增殖抑制率逐渐升高,差异具有统计学意义(P<0.05) 2.流式细胞术检测不同浓度DAC及有/无AA作用于三种细胞,细胞凋亡率均有不同程度增高,各药物浓度与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);地西他滨作用于三种细胞,P170蛋白表达水平均随药物浓度增高而下降. 3. RT-PCR方法检测地西他滨作用于三种细胞48h后,随药物浓度增加MDR1mRNA表达均逐渐减少,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01). 结论: 1.地西他滨分别对K562细胞、K562/ADR细胞、原发耐药的AML原代细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,且呈时间-剂量依赖性,地西他滨联合AA治疗原发耐药的AML原代细胞比单纯用AA治疗有效率高. 2.在一定浓度范围内,地西他滨可下调MDR1mRNA基因及P170蛋白的表达,说明地西他滨抑制三种耐药细胞增殖,诱导其凋亡的机制可能与下调MDR1mRNA基因和P170蛋白的活性相关.
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