摘要
目的：本研究旨在探讨纳米级炭黑诱导 16HBE 细胞毒性作用以及miR-96靶向FOXO3a在其中的作用研究。 方法：16HBE(中国典型培养物保藏中心)于含10%热灭活胎牛血清的MEM培养基 37℃，5%CO2饱和湿度下培养。选择对数生长期的细胞，用纳米级炭黑处理24小时，剂量分别为0、50、100和200μg/mL；以MEM为阴性对照。采用RT-qPCR法检测16HBE细胞miR-96水平，流式细胞仪检测活性氧水平，AnnexinV-FITC 和 PI 染色并用流式细胞仪检测细胞凋亡，单细胞凝胶电泳(SCGE)测定DNA损伤以及Western Blot方法测定FOXO3a蛋白含量。设计特异的miR-96抑制序列(miR-96 Inhibitor)和miR-96模拟序列（miR-96 Mimic），脂质体转染，构建miR-96高表达和低表达16HBE细胞。 结果：纳米级炭黑处理16HBE细胞后，部分细胞贴壁不牢，折光率差；各剂量组细胞miR-96水平较炭黑处理前明显降低而ROS水平、OTM值、凋亡率显著升高；炭黑处理后FOXO3a蛋白含量是处理前的1.6倍。瞬时转染Mimic组miR-96水平是转染NC Mimic组的7.01倍，转染Inhibitor组miR-96水平是转染NC Inhibitor组的0.47倍，说明miR-96高低表达细胞株构建成功。炭黑诱导NC Mimic组、Mimic组、NC Inhibitor和Inhibitor组ROS水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率和FOXO3a蛋白含量显著升高，存活率显著降低。炭黑处理后 Mimic 组 ROS 水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率、存活率和FOXO3a蛋白含量分别为炭黑处理后NC Mimic组的0.78倍、0.51倍、0.70倍、0.49倍、1.05倍、0.67 倍，即炭黑处理后 Mimic 组各指标升高的幅度低于炭黑处理后 NC Mimic组。炭黑处理后Inhibitor组ROS水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率、存活率和FOXO3a蛋白含量分别为炭黑处理后NC Inhibitor组的1.57倍、2.84倍、1.99倍、1.63倍、0.89倍、1.72倍，即炭黑处理后Inhibitor组各指标升高的幅度高于炭黑处理后NC Inhibitor组。 结论：纳米级炭黑诱导16HBE细胞产生氧化损伤，DNA损伤和细胞凋亡。纳米级炭黑可以抑制miR-96的表达；miR-96 Mimic可以减轻纳米级炭黑诱导的 16HBE 细胞氧化损伤，DNA 损伤和细胞凋亡；miR-96 Inhibitor促进纳米级炭黑诱导的16HBE细胞氧化损伤、DNA损伤和细胞凋亡。纳米级炭黑诱导16HBE细胞FOXO3a蛋白表达增加，其机制可能与炭黑对miR-96的抑制作用有关。
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