摘要
附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx.的子根加工品，为川产道地药材，首载于《神农本草经》，性辛甘、大热、有毒，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛之功。附子的应用由来已久，从古至今在临床的使用疗效显著，被誉为“回阳救逆第一品药”，同时也是一味著名有毒中药。历代医家为了减其毒性，提高临床使用的安全性与疗效，探索了很多方法，主要是通过配伍减毒与炮制减毒。附子的的炮制方法多种多样，流传至今的已不多，目前《中国药典》2015年版以及产地加工中多采用胆巴浸泡的方式，以达到减毒防腐的目的。因此，为了阐明胆巴炮制附子的本质，促进附子合理、科学的盐制规范的建立。本课题将从化学成分和神经毒性方面，比较盐胆巴炮制工艺中关键环节对附子质量与毒性的影响，主要研究方法与结果如下： 1.胆巴炮制对附子化学成分的影响：通过紫外-分光光度法、高效液相色谱法对生附子以及不同浓度胆制的盐附子进行生物碱类成分的比较研究，评价其质量。（1）采用单因素、正交设计试验优化附子总生物碱的微波提取工艺，最佳工艺参数为：取附子药材粉末，加入80倍0.5%甲酸溶液，于90℃、800 W的条件，微波提取12 min，该方法的建立为下一步总生物碱的比较研究提供技术支撑。（2）生附子以及不同浓度胆巴炮制品之间总生物碱、酯型生物碱含量具有差异性，生附子总生物碱含量最高，经胆巴炮制后明显降低，40%胆巴炮制品总生物碱含量最低。6种酯型生物碱经胆制后含量均明显降低，毒性减小，以单酯型生物碱与双酯型生物碱的相对含量为评判指标，30%与40%胆制附子的质量最好，因此，选择40%胆巴作为盐制附子的用盐量。 2.盐附子漂洗工艺对胆巴以及总生物碱的影响研究：胆巴中主要含有氯化钙、氯化镁等无机盐，采用微波消解法处理样品，等离子体电感耦合发射光谱、离子色谱、EDTA配伍滴定、银量法测定盐附子漂洗液中钙离子、镁离子、氯离子的含量，采用紫外分光光度法测定漂洗液中总生物碱的含量。（1）建立了一套完整测定胆巴含量的方法体系，为盐附子的研究提供了新的技术手段。（2）钙离子、镁离子与氯离子在漂洗第一天至第二天的溶出量最大，随着漂洗时间的延长，溶出量减少，且总生物碱也是第一天流失最多，随着漂洗时间的延长，没有显著性增加或减少。可见盐附子需漂洗一至两天后换水继续漂洗，才能彻底漂洗干净，持续浸泡漂洗不能达到完全去盐的目的。 3.胆巴炮制对附子神经毒性的影响：采用MTT法测定附子对PC12细胞的神经毒性作用，双酯型生物碱是附子神经毒性的主要物质基础，尤以乌头碱的毒性最大，单酯型生物碱对PC12细胞基本不表现出神经毒性作用。除脂溶性生物碱以外，水溶性生物碱也对PC12细胞具有神经毒性作用，因此在附子煎煮时，久煎时间不宜过长，以1小时为宜。不同盐制品之间，40%与45%浓度胆巴炮制的附子毒性较低，40%低剂量还具有明显的神经保护作用，因此盐制附子宜选用40%胆巴。40%胆制附子的神经毒性作用提示盐附子对神经系统可能具有双重作用，低剂量起保护作用，高剂量则表现出神经毒性。 创新点： （1）建立炮制辅料胆巴的快速测定方法，首次运用离子色谱法测定胆巴中钙、镁、氯离子含量，为盐附子的研究提供新的技术手段。 （2）建立了附子总生物碱的微波提取工艺，实现了附子总生物碱的高效提取，也为其他药材的提取提供参考。 （3）首次对六种酯型神经毒性进行研究，在细胞层面揭示了附子神经毒性的物质基础，为附子进一步神经毒性的研究奠定基础。 （4）首次将化学成分与毒性作用结合起来，运用于附子的炮制工艺的优选，为附子规范化炮制工艺的建立提供新的思路。
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