摘要
在运用传统的间歇曝气富集和选择性培养基法筛选好氧反硝化菌的基础上，首次引入超声波预处理沉积物-水悬液，从西安市黑河金盆水库、兴庆公园和长乐公园沉积物中分离筛选出高效好氧反硝化菌群，好氧反硝化细菌和好氧反硝化真菌。并对好氧反硝化菌群脱氮特性及种群结构，好氧反硝化细菌在好/厌氧状态下的脱氮特性以及narG、nirS和nosZ功能基因的表达水平和好氧反硝化真菌的脱氮特性进行研究。进一步，选取西安市区6个典型城市湖泊景观水体作为研究对象，在分析水体水质指标的基础上，运用Illumina高通量测序技术对湖水中的nirS型反硝化细菌种群结构和多样性进行诊断，以期探明城市湖泊景观水体水质与反硝化细菌种群结构多样性的偶联机制。本研究主要成果结论如下： （1）成功筛选出3组高效好氧反硝化菌群H-30，X-10和C-30，并对其好氧反硝化能力进行研究。结果表明，该3组混合好氧反硝化菌群具有高效的脱氮能力，24h后，混合菌群H-30，X-10和C-30总氮(TN)去除率分别达到83.04%，83.40%和82.68%，仅有少量亚硝氮(NO2--N)积累。由Illumina Miseq高通量DNA测序可知，3组nirS型好氧反硝化优势混合菌群种群结构差异显著。其中，混合菌群H-30， X-10 和 C-30 的优势菌种分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），Paracoccus pantotrophus 和斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）。其中，斯氏假单胞菌（P. stutzeri）在3组混合菌群中均存在，在H-30、X-10菌群中占比水平相当，而P. xiamenensis仅存在于混合菌种H-30。 （2）KK99菌株在好/厌氧条件下，均能进行反硝化作用，且在两种不同的条件下均具有高效的脱氮效率。narG基因的表达量比较低，因此在基因表达水平上，该酶起的作用比较小；而nirS基因和nosZ基因的表达量比较高，但是在好/厌氧条件下的差异比较显著。在厌氧条件下，nirS基因起主要的作用；在好氧条件下，nosZ基因起主要的作用；功能基因的检测解释了菌株在厌氧、好氧条件下均能进行反硝化的原因。同时该菌株还具有同步硝化反硝化能力，在好氧条件下，能同时去除硝酸盐氮和氨氮，24h时，TN去除率为76%。 （3）真菌KPL108能够同步进行硝化反硝化反应。在以硝酸盐氮为唯一氮源的反硝化系统中，25h时，硝氮去除率能达到97%，没有亚硝氮积累。反硝化过程的氮平衡分析表明大约92%的初始氮以气体的形式去除。响应曲面实验揭示了脱氮的最优条件是：C/N为6.42，转速为109.68r/min，温度为28.48℃和初始pH值为8.15。对总氮去除率影响最为显著的自变量为初始pH值和温度。结果表明真菌KPL108能够用于微污染水源水库的微生物修复。 （4）6个城市湖泊景观水体中，永阳公园水体符合Ⅳ类水标准，而曲江池、木塔寺生态遗址公园、新纪元公园水体符合V类水质标准，丰庆公园和劳动公园水体属于劣V类水。高通量测序结果表明，6个城市湖泊景观水体nirS型反硝化细菌种群结构差异显著。其中，丰庆公园和劳动公园水体的最优势反硝化菌属为副球菌属（Paracoccus sp.）；曲江池和永阳公园水体的最优势反硝化菌属为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）；木塔寺生态遗址公园和新纪元公园水体的最优势反硝化菌属为红长命菌属（Rubrivivax sp.）。通过主成分分析（PCA）可知，城市湖泊景观水体水质指标中的 NH4+-N 和高锰酸盐指数含量是影响新纪元公园和木塔寺公园水体nirS型反硝化细菌种群结构的显著因素；而NO3--N、NO2--N、TN、TP和DO是影响劳动公园和丰庆公园水体nirS型反硝化细菌的种群结构的显著因素（蒙特卡洛检验，P<0.05）；水体pH显著影响永阳公园水体nirS型反硝化细菌的种群结构（蒙特卡洛检验，P<0.05）。结果表明，西安市典型城市湖泊景观水体nirS型反硝化细菌的种群结构受不同水质指标的综合调控。
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