摘要
中华鳖（Pelodiscussinensis）属于爬行纲（Reptilia），龟鳖目（Testudines），鳖科（Trionychidae），鳖属（Pelodiscus），是我国重要的特种水产经济动物。中华鳖不同性别之间存在明显的生长差异，雄性个体显著比雌性个体生长快，体型也较大，裙边宽厚，深受养殖者青睐和消费者喜爱。另外，中华鳖雄性苗种价格也较雌性高。因此，高雄性中华鳖苗种对于中华鳖养殖业具有重要意义。本研究开展了孵化温度和激素对中华鳖性别分化影响的研究，并克隆了在性腺分化中起重要作用的Cyp19a基因cDNA全长，分析了Cyp19a基因在成体各组织以及胚胎各时期的表达特征，为进一步研究高雄性中华鳖苗种诱导提供了基础。主要研究结果如下： 1、温度对中华鳖苗种性别的诱导 通过不同的孵化温度孵化中华鳖受精卵表明，在26℃-34℃之间，孵化温度越高，孵化时间越短；反之，孵化时间则越长。随着孵化温度的升高，雄性率升高。在26℃孵化时，雄性率为45.1%；在30℃孵化时，雄性率为53.4%；在34℃孵化时，雄性率为62.2%。 2、外源激素对中华鳖苗种性别的影响 中华鳖受精卵在30℃孵化第15d时，向其注射甲基睾酮、雌二醇和芳香化酶抑制剂，孵化到第35d时，胚胎的外部形态有明显的差异。甲基睾酮处理组中，胚胎有生殖器外翻的现象，而雌二醇和芳香化酶抑制剂处理组的胚胎尾部有轻微的肿大。在甲基睾酮处理组别中，随着激素浓度的升高，雄性率呈上升趋势，浓度为2.5mg/mL时，雄性率为56.8%；浓度为5mg/mL时，雄性率为60.9%，浓度为10mg/mL时雄性率达到63.3%。注射芳香化酶抑制剂时，随着浓度的增加，雄性率呈上升的趋势，浓度为2.5mg/mL时，雄性率为48.2%；浓度为5mg/mL，雄性率为50.6%；浓度为10mg/mL组的雄性率为62.9%。雌二醇处理组中，随着浓度的上升，雌性率呈上升的趋势，浓度为2.5mg/mL时，雌性率为45.9%，浓度为5mg/mL组的雌性率为52.0%；浓度为10mg/mL时，雌性率为53.6%。结果表明，甲基睾酮、雌二醇和芳香化酶抑制剂对中华鳖性别分化具有一定的诱导作用。 3、中华鳖Cyp19a基因的克隆及表达特征分析 中华鳖Cyp19a基因全长2285bp，其中包括138bp5′端非翻译区，635bp3′端非翻译区，1512bp开放阅读框（ORF），编码503个氨基酸。Cyp19a基因在成年中华鳖的卵巢中表达量最高，脑和肠次之，精巢、肺和眼表达最弱，在心脏、肝脏和肌肉中几乎不表达。在中华鳖胚胎发育的第14期，Cyp19a基因的表达量急剧上升，表明30℃下胚胎发育的第14期是中华鳖胚胎性腺发育的重要时期。芳香化酶抑制剂对中华鳖胚胎处理后，Cyp19a基因的表达呈先上升后下降的趋势，在72h显著性高表达（P＜0.05）；雌二醇对中华鳖胚胎处理后，Cyp19a基因的表达呈上升趋势。
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