摘要
第一部分：c-MYC调控ER阳性乳腺癌他莫昔芬耐药后化疗敏感性的机制研究 目的：探讨雌激素受体（Estrogen Receptor, ER）阳性乳腺癌他莫昔芬（Tamoxifon, TAM）耐药对化疗药物敏感性的影响及其机制，寻找临床TAM耐药患者的敏感化疗药物及相应的分子标志物。 方法：采用小浓度持续诱导法在ER阳性乳腺癌细胞系中建立TAM耐药细胞系，通过CCK-8法验证其对TAM的耐药性、流式细胞仪检测细胞周期的变化、transwell 实验检测细胞侵袭能力、Western blot 验证耐药细胞相关标志物的变化。通过基因芯片和生物信息学方法寻找TAM耐药的靶基因，并在建立好的耐药模型中进行验证。使用不同浓度的临床常用化疗药物阿霉素（Adriamycin, ADR）、紫杉醇（Paclitaxel, PTX）和顺铂（Cisplatin, CP）处理TAM耐药及敏感细胞，CCK-8法评估细胞在TAM耐药后对不同化疗药物的敏感性。使用小干扰RNA （Small interfering RNA, siRNA）改变耐药细胞中靶基因的表达后检测其对化疗药物敏感性的变化。收集TAM耐药患者的临床病理信息和详细治疗方案，追踪其后续化疗效果，评估其对各种化疗方案的缓解情况，同时收集患者治疗前后的组织标本，进一步验证体外实验结果。 结果：采用低浓度持续诱导法在MCF-7和T47D细胞中成功诱导出TAM耐药细胞MCF-7R和T47DR。在形态上，TAM耐药细胞更为扁平，以尖角形和多角形为主，排列无规则且分散，更为接近于间质细胞。流式细胞仪检测细胞周期的变化发现ER阳性乳腺癌细胞在发生TAM耐药后G0/G1期细胞比例明显减少，S期细胞比例明显增加，提示细胞增殖能力增强。Transwell实验结果显示TAM耐药细胞相较于敏感细胞侵袭能力明显增强。western blot实验结果表明细胞在TAM耐药后P21、E-cadherin蛋白水平降低，ER、HER2、cyclinD1、vimentin蛋白水平升高，与细胞功能实验结果及临床TAM耐药患者特征相吻合。生物信息学及数据库分析结果表明癌基因c-MYC可能在ER阳性乳腺癌中参与TAM耐药，Western blotting实验结果表明c-MYC及其上游通路p-AKT及β-catenin的表达在TAM耐药细胞中明显升高，同时使用特异性siRNA敲除TAM耐药细胞中c-MYC的表达水平后可以恢复细胞对TAM的敏感性。此外，在28例TAM耐药的复发转移性乳腺癌患者中，免疫组化（Immunohistochemistry , IHC）检测结果表明c-MYC在TAM治疗前的肿瘤原发灶中表达较低，而在TAM耐药的复发转移灶中表达明显升高。ER阳性乳腺癌细胞在TAM耐药后对ADR和PTX敏感性下降，而对CP的敏感性上升。Western blotting检测发现经CP处理的MCF-7R细胞中c-MYC的表达水平明显降低。在MCF-7R细胞中使用siRNA抑制 c-MYC的表达后可以明显降低细胞对CP的敏感性。同时，临床TAM耐药患者对含有CP化疗方案的缓解率明显高于其他化疗方案。 结论：ER阳性乳腺癌在TAM耐药后增殖和侵袭能力增强，并表现出对CP更高的敏感性。c-MYC表达升高是ER阳性乳腺癌TAM耐药的机制之一，但它的高表达也能增强细胞对CP的敏感性。因此，对于临床c-MYC高表达的TAM耐药患者，应该选择CP作为其化疗首选药物。 第二部分：Ki67对不同分子亚型乳腺癌新辅助化疗效果的预测作用 目的：评估化疗前Ki67和化疗中Ki67的变化对不同分子亚型乳腺癌新辅助化疗（Neoadjuvant chemotherapy, NAC）效果的预测作用。 方法：回顾性分析2012年1月至2017年7月在我院接受蒽环和紫杉类药物联合NAC的1010例乳腺癌患者的临床病理资料，评估患者的临床病理参数对 NAC反应的预测作用。 结果：纳入研究的患者中有705例（69.8%）对NAC有效（Clinical Remission, cRes ），其中 131 例（ 13.0%）患者达到病理完全缓解（ Pathologic Complete Remission, pCR ）。化疗前高 Ki67 （≥14%） (P<0.001)，肿瘤直径≥4cm(P<0.001)，存在淋巴结转移(P=0.03)的患者NAC的临床缓解率较高，同时ER和PR为阴性(P<0.001)，化疗前高Ki67（≥14%）(P<0.001)，肿瘤直径<4cm (P=0.038) 的患者更容易达到pCR。化疗前Ki67仅在luminal型患者中对NAC反应起预测作用，同时25.5%的Ki67表达被定义是区分临床有效和无效的理想截断值(P<0.001)。尽管NAC后几乎所有分子亚型的患者均出现了Ki67表达降低，但在HER2过表达和TNBC亚型患者中，临床治疗有效组与无效组之间的Ki67降低值没有统计学上的差异（p=0.488和p=0.111）。 结论: 在luminal型乳腺癌中，化疗前Ki67对预测患者NAC效果的最佳截断值为25.5%。对在NAC中表现出肿瘤缩小但仍具有高表达Ki67的HER2过表达和TNBC型患者，应考虑更加积极的术后辅助性全身治疗。
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