摘要
昆仑雪菊（Coreopsis tinctoria）作为一种名贵的药食两用草本植物，在传统上作为花茶冲泡饮用，所以更应该关注其亲水性活性组分。雪菊水提取物中的主要活性成分是黄酮和酚酸类化合物，具有抗氧化、抗衰老、降血糖、降血压、抑菌和抗炎等生理活性，但目前对雪菊的抗衰老作用研究还不够深入，抗衰老作用机制并不明确，且关于胎菊的抗衰老作用还未见报道。因此，本论文以昆仑雪菊（朵菊、胎菊）为原料，通过响应面法优化其水提取最优工艺条件，采用 DPPH、ABTS、FRAP 还原力和 ORAC 等方法评价昆仑雪菊水提取物的体外抗氧化活性；采用 HPLC-DAD 初步定性定量分析昆仑雪菊水提取物中的几种主要活性成分，并进一步采用UPLC-Q-TOF-MS鉴定其组分；以D-半乳糖致衰老小鼠为模型，研究昆仑雪菊（朵菊、胎菊）水提取物对衰老小鼠的抗衰老作用及其可能分子机制。为昆仑雪菊药食功能的进一步开发和应用提供理论依据。主要研究结果如下： （1）通过单因素和响应面试验得到昆仑雪菊（朵菊）的最优水提条件为：水提时间13 min、水提温度98℃、液料比74∶1（mL/g）；昆仑雪菊（胎菊）的最优水提条件为：水提时间15 min、水提温度96℃、液料比71∶1（mL/g）。朵菊和胎菊水提 3次的活性价值均较好，水提 3次后，胎菊水提取物的黄酮和多酚浸出率以及ORAC抗氧化能力均高于朵菊水提取物，说明胎菊比朵菊更加耐泡。 （2）昆仑雪菊（朵菊、胎菊）水提取物具有具有一定的体外抗氧化活性。朵菊和胎菊水提取物的清除DPPH+? EC50值分别为35.396 μg/mL、48.429 μg/mL；清除ABTS+?EC50值分别为0.872 μg/mL、0.932 μg/mL；铁还原力EC50值分别为102.075 μg/mL、116.127 μg/mL；ORAC值分别为1627.763 μmoL TE/g DW、875.445 μmoL TE/g DW。朵菊水提取物的体外抗氧化活性高于胎菊水提取物。 （3）采用 HPLC-DAD 分析昆仑雪菊（朵菊、胎菊）水提取物组分中黄诺马苷含量最高（朵菊31.991 mg/g DW；胎菊13.644 mg/g DW），其次马里苷（朵菊22.899 mg/g DW；胎菊13.387 mg/g DW）、儿茶素（朵菊2.846 mg/g DW；胎菊2.219 mg/g DW）、花旗松素（朵菊2.734 mg/g DW；胎菊2.105 mg/g DW）、绿原酸（朵菊1.707 mg/g DW；胎菊0.940 mg/g DW）。采用UPLC-Q-TOF-MS鉴定出昆仑雪菊水提取物中共鉴定出12种组分，其中包括3种酚酸类物质和9种黄酮类物质，分别是绿原酸、咖啡酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、花旗松素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、黄诺马苷、紫铆素-7-O-β-D-葡糖吡喃糖苷、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、乙酰-马里苷、马里苷、金鸡菊苷、紫铆花素、金鸡菊查耳酮。 （4）昆仑雪菊（朵菊、胎菊）水提取物对 D-半乳糖诱导衰老小鼠体内相关生化指标有一定的影响。与衰老模型组（MC）相比，朵菊低、高剂量组（CTF-L， 500 mg/kg?d；CTF-H，2000 mg/kg?d）和胎菊低、高剂量组（CTB-L，500 mg/kg?d；CTB-H，2000 mg/kg?d）均能显著缩短衰老小鼠寻找到平台的潜伏期（ P＜0.05 ， P＜0.01 ） ，显著增加穿越目标象限次数（ P＜0.05 ）。与 MC 相比， CTF-L 和 CTB-L 均能显著升高衰老小鼠血清及肝脏中 SOD、T-AOC（P＜0.05），降低 MDA （ P＜0.05 ）；显著升高脑组织 GSH-Px （ P＜0.05 ） ，降低 MDA （P＜0.05）。与 MC相比， CTF-H和 CTB-H均能显著升高衰老小鼠血清及肝脏中 SOD、GSH-Px 、T-AOC（P＜0.05）；显著升高脑组织 SOD、GSH-Px 、T-AOC、Ach（P＜0.05），降低 MDA、AchE（P＜0.05）。CTF-L、CTF-H、CTB-L和CTB-H均能在一定程度抑制D-半乳糖诱导的肝组织及神经细胞病变。 （5）昆仑雪菊（朵菊、胎菊）水提取物对 D-半乳糖诱导衰老小鼠的抗衰老作用机制研究发现，与 MC相比，CTF-L能显著促进 Sirt1、Nrf2（胞核）、HO-1、NQO1、Sirt3 蛋白表达（P＜0.05），显著抑制 Nrf2（胞浆）蛋白表达（P＜0.05）；CTB-L能显著促进 Sirt1、Nrf2（胞核）、HO-1、NQO1、Sirt3蛋白表达（P＜0.05）；CTF-H和 CTB-H均能显著促进Sirt1、Nrf2（胞核）、HO-1、NQO1、Sirt3蛋白表达（P＜0.05），显著抑制Nrf2（胞浆）和p53蛋白表达（P＜0.05）。 综上所述，昆仑雪菊（朵菊、胎菊）水提取物中富含黄酮及酚酸类化合物，具有较强的抗氧化活性；昆仑雪菊水提取物对 D-半乳糖诱导衰老小鼠具有良好的抗衰老作用，其作用机制可能是通过激活 Sirt1/Nrf2 信号通路增强机体抗氧化防御系统，从而抑制机体氧化应激反应延缓衰老。
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