摘要
目的：研究阿里红多糖（Fomes officinals polysaccharide，FOPS）及阿里红多糖纯化组分（FOPS-a）对巨噬细胞RAW264.7中TLR4介导的NF-κB、MAPK信号介导途径的影响，并初步探讨确定FOPS和FOPS-a对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用机制。 方法：1）采用实时荧光定量（qRT-PCR）法检测不同浓度（50、100、200μg/mL）FOPS及多糖纯化组分FOPS-a对TLR4、NF-κBp65、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6、以及MAPK信号通路中P38、ERK、JNK等基因mRNA表达量的影响。2）免疫印迹法（Western Blot）考察FOPS及FOPS-a对TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65（p-NF-κBp65、p-IκBα）、MAPK（p-P38、p-ERK、p-JNK）等信号转导关键节点蛋白的表达和磷酸化水平的影响。3）用NF-κB抑制剂BAY11-7082和MAPK三个亚基的抑制剂PD98059、SP600125、SB203580预处理细胞后，酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6等细胞因子的释放量。 结果：1）qRT-PCR实验结果表明，与空白对照组相比，FOPS和FOPS-a能够显著上调TLR4、p65基因的mRNA相对表达量，并且增加iNOS、TNF-α、IL-1β及IL-6等因子的基因含量。2）Western Blot实验结果表明，与空白对照组相比，FOPS和FOPS-a能够显著上调TLR4、MyD88、TRAF6、p-NF-κBp65、p-IκBα、p-ERK、p-P38的蛋白表达量以及磷酸化水平。3）通过特异性分子阻断剂抑制NF-κB途径，可以显著抑制FOPS及FOPS-a对巨噬细胞RAW264.7分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的促进作用；阻断MAPK信号通路可以显著抑制FOPS及FOPS-a激活的ERK、P38和JNK途径，并且可以显著下调FOPS及FOPS-a诱导巨噬细胞RAW264.7分泌TNF-α的水平。 结论：FOPS和FOPS-a对RAW264.7巨噬细胞免疫作用的机制之一是通过激活TLR4-MyD88-TRAF6-NF-κB/MAPK信号通路而实现的。FOPS及FOPS-a诱导巨噬细胞释放TNF-α、IL-1β及IL-6等细胞因子的过程与NF-κB、MAPK途径有关。
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