摘要
目的：通过对没食子原药材和药渣中多糖含量的比较，结合前期对二者中其他成分的测定研究，证实药渣中仍残留大量活性成分；为增强没食子生药有效成分的溶出和吸收，提高药物疗效，节省药材资源，拓展没食子高效利用途径，也为没食子超微粉的近一步开发应用提供科学理论依据。1.对没食子原药材和药渣中多糖含量进行测定比较，并结合前期对原药材和药渣中其他成分的比较研究，制定没食子成分最大化溶出方案：药材粉末化；2.制备5种不同粒径的没食子粉末（TGP），并进行粉体学特性分析及粉末特征分析；3.对5种不同粒径的TGP进行化学成分及结构分析；4.比较5种不同粒径的TGP对3种抗氧化实验模型的影响；5.分析没食子对3种结肠癌细胞的抑制作用；6.探究没食子对NRK-GFP-LC3细胞的自噬作用。 方法：1.采用紫外-可见分光光度法（UV-Vis）测定没食子药材和药渣中多糖含量；2.采用振动式细胞级超微粉碎技术（TY-L8振动式细胞级超微粉碎机）制备5种不同粒径的TGP，以微米激光粒度仪测定粒径分布情况；3.通过粉体特性测试仪检测5种不同粒径TGP的休止角、滑动角、崩溃角、松装密度、振实密度等粉体特性指标；4.在40、55、70、85、100℃五种温度条件下，对5种不同粒径TGP溶出度进行测定；5.显微分析：在荧光倒置显微镜下观察没食子药材粉末特征；6.SEM分析：观察5种不同粒径TGP粉末形状差异以及普通粉碎和超微粉碎颗粒形态差异；7.利用反相高效液相色谱技术（RP-HPLC）测定比较5种不同粒径的TGP提取物中没食子酸（Gallic acid-GA），没食子酸甲酯（Methyl gallate-MG），鞣花酸（Ellagic acid-EA）的含量差异，并进行方法学考察分析；8.IR分析：对比5种不同粒径TGP及其对应提取物的结构差异；9.建立DPPH、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除实验，比较不同粒径粉末的抗氧化活性作用并与相关化学成分作相关性分析；10.采用MTT比色法对三种不同类型的结肠癌细胞（HCT-116、SW480、Caco-2）增值抑制作用进行研究；11.利用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察给药后NRK-GFP-LC3细胞的三维形态变化，分析自噬凋亡现象。 结果：1.10批没食子药渣中多糖提取率在1.05-1.24%之间，10批没食子原药材多糖的提取率为4.49-5.53%，结合前期对二者其他成分的研究结果，也同样显示出药渣中剩余成分较多；经过振动式超微粉碎处理的TGP粒径大小为：＞450、400-250、250-100、100-50、＜50μm，对其物理化学特性和粉末特性进行了评价性研究；2.根据粉体物理性质实验结果分析，松装密度(0.68-0.32g/cm3)和振实密度(0.83-0.70g/cm3)随粒径的减小而降低，休止角(35.43°-56.28°)、滑动角(35.54°-59.23°)、崩溃角(35.68°-56.28°)的角度随粒径的减小而变大。总灰分含量从2.34%下降到1.75%，但水分和水溶性指数有所提高；3.粒径＜50μm的TGP提取物中没食子酸（9.47mg/g）、没食子酸甲酯（34.78mg/g）、鞣花酸（0.79mg/g）这三种成分的含量最高；4.另粒径＜50μm时，对DPPH、羟自由基和超氧阴离子自由基清除实验的抗氧化活性最佳(p＜0.05)；5.此外，FTIR分析表明，随着粉末粒径的减小，振动式超微粉碎的处理并没有破坏粉末中主要成分的结构；6.SEM图像清晰显示了不同粒径的状态，以及普通粉碎和振动式超微粉碎的颗粒形态。显微观察中出现导管、油细胞、淀粉颗粒和晶体纤维等粉末特性；7.MTT法有效显示没食子提取物及GA、MG、EA在相应浓度范围对结肠癌细胞增殖具有抑制作用，在给药48小时培养条件下，结果具有统计学意义；8.LSCM观察没食子提取物及GA、MG、EA对NRK-GFP-LC3细胞中自噬体表达的作用效果，从横向药物浓度变化、纵向药物持续时间变化，以及整体药物种类差别这3个角度分析，NRK-GFP-LC3细胞自噬作用受以上3各方面因素的共同影响。 结论：为了提高没食子生药资源利用率，以超微粉碎技术，优化没食子原药材粉碎方案，对TGP的理化特性、生物活性等进行多方面评价性研究。其次，证明了没食子提取物对结肠癌细胞的抑制作用，及通过引起细胞自噬凋亡而达到抗癌效果。
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