摘要
目的：采用基于背景荧光猝灭--免疫层析技术研制出尿纤维链接单蛋白（fibronectin，Fn）定量检测卡，建立一种快速、简单、无创的定量检测膀胱癌肿瘤标记物的方法，用于膀胱癌患者诊断与筛查。 方法：利用抗原-抗体反应原理，筛选出最佳检测卡示踪抗体量与捕获抗体划膜浓度，研制出Fn定量检测卡，并利用研制出的Fn定量检测卡探索检测膀胱癌患者所用的最佳稀释液，分别检测膀胱癌组尿液50例、健康人组100例、其他部位肿瘤组50例和良性泌尿系统疾病组14例，检测结果中选取50膀胱癌患者和30健康人检测结果与ELISA方法检测结果对比。利用统计分析确定出膀胱癌患者cut-off值、灵敏度、特异度，并对检测结果进行LSD-t多重比较显著性分析。 结果：经过实验探究，最终确定检测小杯内标记示踪抗体量为OD2010uL25nm粒径胶体金，检测卡捕获抗体划膜浓度为2mg/mL。选用含2%小牛血清PBS溶液稀释20例健康人混合尿液5倍作为定标基质液做标准曲线F1/F2值有较好的区分能力，且相关性良好r=0.9992。检测的150份样品中Fn的约登指数最大为0.69对应的CFn=324.05ng/mL即为cut-off值，对应的灵敏度为70.0%，特异度为99.0%。按照绘制的Fn ROC曲线，计算曲线下面积(AUC）为0.795，诊断具有较好的准确性，同时与AUC等于0.5相比，P＜0.05，Fn指标在膀胱癌患者和健康人尿液之间存在显著性差异，具有统计学意义，在Fn检测结果统计分析中，膀胱癌患者组与其它各组Fn值均具有极显著性差异性（t=0.00、P＜0.05），而其它各组之间相互比较均无显著性差异（P＞0.05）。采用背景荧光猝灭-免疫层析法(bFQICA)与ELISA试剂盒方法同时测定临床样本膀胱癌患者50例、健康人30例共计80例，将两种方法检测结果进行一元线性回归相关性分析。回归方程为：y=1.3829x-193.5相关系数r=0.9710，两者相关性良好（P＜0.01）。 结论：研制出的Fn定量检测卡是基于抗原、抗体的反应，专属性强，灵敏度高；液体样品的检测无需样品前处理，检测速度快，每份样品检测仅需15min，有望成为膀胱癌辅助诊疗的新方法。
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