摘要
本论文利用抗原抗体特异性结合的原理，对氯唑西林可视化免疫亲和凝胶柱方法进行了系统的研究。通过优化各项实验指标，建立了一种用于检测动物源性食品中氯唑西林的可视化免疫亲和凝胶柱检测方法。 采用碳二亚胺法制备氯唑西林免疫抗原和检测抗原，免疫5只小鼠，得到了氯唑西林多克隆抗体，对5组抗体效价进行测定，结果表明效价均达为1∶64000。分别测定5组氯唑西林抗体的特异性，绘制的氯唑西林抗体的抑制曲线，最终筛选出灵敏度最高的氯唑西林抗体，其回归方程为y=-0.5842x+0.9391（R2=0.9924），IC50值为（5.64±0.03） μg/L，IC15值为(1.42±0.02) μg/L。 实验采用活化酯法,将辣根过氧化物酶(HRP)与氯唑西林偶联，制得氯唑西林酶标抗原。使用盐酸调节琼脂糖凝胶状态，将其吸附能力到达最大强度。然后将氯唑西林抗体和辣根过氧化物酶抗体分别凝胶结合制得氯唑西林抗体胶和HRP抗体胶。建立氯唑西林可视化免疫亲和凝胶柱分析方法，确定了该方法在酶标抗原的稀释倍数为4000、HRP胶稀释倍数为20、抗体胶稀释倍数为10、加样时间为60 s条件下、样品稀释液pH值为5.7，达到最佳工作状态。 氯唑西林可视化免疫亲和凝胶柱的方法检测限为25 μg/L，且与哌拉西林、阿莫西林、氨苄青霉素、氯唑西林、呋喃它酮、甲砜霉素、链霉素均无交叉反应。 选取经高效液相色谱法测定无氯唑西林抗生素检出的猪肉、鸡肉、牛肉、牛奶、发酵乳和奶粉作为实际样品进行氯唑西林的添加回收实验，经前处理和消除基质影响，用于凝胶柱检测。经多次检测，确定了在动物源食品实际样品中氯唑西林检出限为25 μg/kg（或μg/L）。 将氯唑西林可视化免疫亲和凝胶柱分别密封保存于4 ℃、25 ℃下进行稳定性测试，结果表明氯唑西林可视化免疫亲和凝胶柱可在4 ℃保存3个月，具有良好的稳定性。 使用高效液相色谱-质谱法验证可视化免疫亲和凝胶柱法的有效性。采用高效液相色谱-质谱法和凝胶柱法同时对实际进行检测，凝胶柱检测结果和高效液相色谱-质谱法结果一致。因此证明氯唑西林可视化免疫亲和凝胶柱检测结果可靠。 该凝胶柱的研制成功，为抗生素残留检测的研究开辟出一条新的思路。该方法便捷、快速、可视化，适合作为高通量筛选氯唑西林的有效检测手段，符合当前食品安全检测的需求。
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