摘要
灵芝(Ganodermalucidum)为我国传统名贵中药，富含三萜、多糖、氨基酸、生物碱等多种活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、保肝护肝等生物活性。随着人们对灵芝保健功能的认识，灵芝的消费群体已从中国、日本、马来西亚等东南亚国家扩展至欧美西方国家，但野生灵芝资源非常稀少，人工栽培是获得灵芝产品的主要方式。在灵芝子实体生长过程中需要高湿度环境，如果管理不善，会导致病原真菌的感染；而且灵芝采后如不能及时干燥亦会发生霉变，为实现灵芝病原真菌的防治，本研究首先对病变灵芝的主要病原真菌进行研究，分离获得的四株病原真菌菌株，经形态学和rDNA-ITS序列分析确定OTA为黄曲霉Aspergillusflavus，OTB和OTD为青霉菌Penicilliuminfrabuccalum，OTC为木霉菌Trichodermasp.。生物学特性研究表明4株病原菌在PDA培养基生长良好，适宜温度为25-30℃；菌株OTA和OTB的最适碳源分别为木糖和葡萄糖，菌株OTC和OTD的最适碳源为果糖和蔗糖；菌株OTA和OTB的最适氮源分别为牛肉膏和尿素，菌株OTC和菌株OTD的最适氮源为NaNO3和蛋白胨；菌株OTB、OTC和OTD酸性条件生长较好，而pH对OTA的生长影响较小。同时试验了植物精油成分异硫氰酸烯丙酯对病原菌的抑止效果，结果表明异硫氰酸烯丙酯对菌株OTA、OTB、OTC和OTD菌丝的生长具有良好的抑制作用，在20μL/L剂量时，对四株菌株的抑制率均超过97%。 灵芝三萜是灵芝中的最主要活性成分之一，其含量的高低直接影响到灵芝的质量，为了提高灵芝子实体中灵芝三萜的含量，本研究在25℃室温条件下，分别采用21、40、60、80、100%浓度的氧以1.5mL/min的流速处理灵芝6天，分析高氧处理对采后灵芝子实体中灵芝三萜生物合成、抗氧化及其DNA损伤保护活性的影响，结果表明，60%氧气浓度可有效减缓失重速度；高氧调控利于灵芝总三萜，黄酮、总酚含量的积累，分别比自然对照组提高了50%-80%；5种三萜单体含量受高氧的影响显著，含量最高的三萜单体为灵芝酸A，约为最低含量灵芝酸C1的10倍；同时高氧使三萜生物合成关键酶基因表达上调：HMGR（3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶）表达量差异性最为显著（P＜0.01），HMGS（3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A合成酶）表达量最高，OSC（环氧鲨烯环化酶）最低。高氧处理亦明显促进灵芝子实体的体外抗氧化活性，对ABTS、超氧阴离子及羟基自由基清除率均比对照组有显著提高。不同浓度氧处理的灵芝子实体对DNA损伤的保护率在30%-65%，60%氧处理3天的样品具有最高的活性，相较于对照组约上升了1.2倍。因此，高氧处理采后灵芝的最佳条件为60%的氧处理3天。 另外，为了增加灵芝三萜化合物的水溶性并在消化液中实现缓释，本研究采用喷雾干燥法制备了灵芝三萜微胶囊，制备微胶囊的工艺为：芯材与壁材的比例为1∶2(m/m)，壁材为阿拉伯胶和β-环糊精，比例为1∶1（m/m），进风温度180℃，流量30ml/min，包埋率可达88.9%。微胶囊化的灵芝三萜释放情况为：模拟肠液＞模拟胃液＞口腔模拟液，肠液中在70min达到最大值87.5%。
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