摘要
背景： PD-1是T淋巴细胞表面的免疫负抑制性受体，与其配体PD-L1相结合，通过产生抑制性的TCR信号，减少细胞因子mRNA合成，导致T淋巴细胞程序性凋亡，抑制T淋巴细胞的增殖和清除病原体的能力。研究报道，肺结核患者T淋巴细胞表面PD-1表达增高，动物实验证明阻断PD-1/PD-L1通路可减少T淋巴细胞的凋亡。我们推测耐多药肺结核患者T淋巴细胞表面表达的PD-1与肺结核患者不同，耐多药肺结核患者T淋巴细胞免疫抑制更严重，导致耐多药肺结核患者T淋巴细胞免疫下降，临床表现出病程长、病灶范围广、难治疗、治愈率低等特点。因此，本研究探讨耐多药肺结核患者T淋巴细胞免疫及PD-1在耐多药肺结核患者T淋巴细胞表面的表达情况，有助于发现耐多药肺结核患者细胞免疫的抑制因素。 目的： 本文旨在探讨耐多药肺结核患者T淋巴细胞免疫及PD-1在T淋巴细胞表面的表达及意义。 第一部分耐多药肺结核患者T淋巴细胞免疫 一.研究对象与方法 1.对象：2018年7月至2018年12月在广州市胸科医院结核内科住院确诊为菌阳耐多药肺结核37例（对异烟肼和利福平同时耐药，简称HR耐药组），选取菌阳肺结核44例作为对照组（对异烟肼和利福平均敏感，简称HR敏感组），选取体检合格者且排除结核病22例作为健康对照组。 2.方法：运用流式细胞技术检测HR耐药组、HR敏感组、健康对照组外周血T淋巴细胞亚群CD3+T、CD4+T、CD8+T的绝对计数；检测研究对象治疗前外周血血清白蛋白。 二.结果 1.三组T淋巴细胞亚群计数情况 (1).CD3+T淋巴细胞计数分别为：HR耐药组728.90±373.49(个/微升)、HR敏感组857.15±426.98(个/微升)、健康对照组1289.50±464.70(个/微升)，三组比较分析(F=13.72,P＜0.001)。 (2).CD4+T淋巴细胞计数分别为：HR耐药组388.80±186.49(个/微升)、HR敏感组483.86±206.59(个/微升)、健康对照组1004.90±431.5(个/微升)，三组比较分析（F=42.18,P＜0.001）。 (3).CD8+T淋巴细胞计数分别为：HR耐药组289.87±177.61(个/微升),HR敏感组391.09±208.83(个/微升)，健康对照组695.00±320.71(个/微升)，三组比较分析（F=25.71,P＜0.001）。 (4).组间的两两比较结果显示在CD3+T淋巴细胞绝对计数方面，HR耐药组与HR敏感组（P=0.17）;HR耐药组与健康对照组（P＜0.001）;HR敏感组与健康对照组（P＜0.001）。在CD4+T淋巴细胞绝对计数方面，HR耐药组与HR敏感组（P=0.12）;HR耐药组与健康对照组（P＜0.001）;HR敏感组与健康对照组（P＜0.001）。在CD8+T淋巴细胞绝对计数方面，HR耐药组与HR敏感组（P=0.62）;HR耐药组与健康对照组（P＜0.001）;HR敏感组与健康对照组（P＜0.001）。 2.T淋巴细胞亚群计数低下者血清白蛋白情况 (1).CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞计数低下的患者同时伴有血清白蛋白低下分别占64.86%、58.82%、60.53%。 第二部分PD-1在耐多药肺结核患者T淋巴细胞上的表达 一.研究对象与方法 1.对象：2018年7月至2018年12月在广州市胸科医院结核内科住院确诊为菌阳耐多药肺结核37例（对异烟肼和利福平同时耐药，简称HR耐药组），选取菌阳肺结核44例作为对照组（对异烟肼和利福平均敏感，简称HR敏感组），选取体检合格者且排除结核病22例作为健康对照组。 2.方法：运用流式细胞技术检测HR耐药组、HR敏感组、健康对照组外周血CD4+T、CD8+T淋巴细胞表面表达的PD-1分子。 二.结果 1.PD-1在CD4+T、@+T淋巴细胞表面的表达 (1).PD-1在CD4+T淋巴细胞表达：HR耐药组：1167（743.501358.00）、HR敏感组：867.00（579.251236.25）、健康对照组：384.00（260.75451.75），三组比较分析（F=18.89,P＜0.001）。 (2).PD-1在CD8+T淋巴细胞表达：HR耐药组：625.00（476.50722.50）、HR敏感组：438.00（372.50545.25）、健康对照组：206.50（160.75270.50），三组比较分析（F=42.05,P＜0.001）。 (3).组间的两两比较结果显示PD-1在CD4+T淋巴细胞表面的表达：HR耐药组与HR敏感组（P=0.016）;HR耐药组与健康对照组（P＜0.001）;HR敏感组与健康对照组（P＜0.001）。PD-1在CD8+T淋巴细胞表面的表达：HR耐药组与HR敏感组（P=0.012）;HR耐药组与健康对照组（P＜0.001）;HR敏感组与健康对照组（P=0.001）。 第三部分耐多药肺结核患者T淋巴细胞高表达PD-1与临床特点相关性分析 一.研究对象与方法 1.对象：2018年7月至2018年12月在广州市胸科医院结核内科住院确诊为菌阳HR耐药与HR敏感的肺结核患者并且同时检测CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞亚群计数和CD4+T、CD8+T淋巴细胞表面表达的PD-1分子。 2.方法：收集本研究第一和第二部分检测的T淋巴细胞亚群绝对计（CD3+T、CD4+T、CD8+T）,CD4+T、CD8+T淋巴细胞表面表达的PD-1的数据。 二.结果 1.HR耐药的肺结核患者和HR敏感的肺结核患者临床特点比较 (1).HR耐药组与HR敏感组在年龄、性别、病程、病灶范围、空洞、血清白蛋白、CD4+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数方面的比较分析P值分别为：（P=0.39）、（P=0.21）、（P＜0.001)、(P＜0.001)、(P=0.004）、（P=0.78）、（P=0.12）、（P=0.62）。提示HR耐药组与HR敏感组在病程、病灶范围、空洞方面有差异。 2.T淋巴细胞表面表达的PD-1与其临床特点相关性分析 (1).CD4+T淋巴细胞表面表达的PD-1分别与病程、病灶范围、空洞、CD4+T淋巴细胞计数之间无明显相关性。 (2).CD8+T淋巴细胞表面表达的PD-1分别与病程、病灶范围、空洞、CD8+T淋巴细胞计数之间无明显相关性。 (3).CD4+T淋巴细胞表面表达的PD-1与年龄、性别、疾病类型（HR耐药/HR敏感）、病程（初治/复治)、病灶范围、空洞、血清白蛋白、CD4+T淋巴细胞计数的广义性线性回归分析，结果显示CD4+T淋巴细胞表面表达的PD-1与疾病类型相关，（P=0.044），与年龄、性别、病程（初治/复治）、病灶范围、空洞、CD4+T淋巴细胞计数无相关性。 (4).CD8+T淋巴细胞表面表达的PD-1与年龄、性别、疾病类型（HR耐药/HR敏感）、病程（初治/复治)、病灶范围、空洞、血清白蛋白、CD8+T淋巴细胞计数的广义性线性回归分析，结果显示CD8+T淋巴细胞表面表达的PD-1与上述因素无相关性。 结论 1.肺结核病人在CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞计数方面是低下的，其中HR耐药的肺结核患者CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞计数低下更明显。 2.肺结核患者T淋巴细胞亚群计数低下的患者多数同时伴有血清白蛋白低下。 3.HR耐药的肺结核患者CD4+T、CD8+T淋巴细胞表面表达的PD-1水平明显高于HR敏感的肺结核患者和健康人群. 4.肺结核患者CD4+T、CD8+T淋巴细胞表面表达的PD-1与其年龄、病程、病灶范围、空洞、血清白蛋白、CD4+T和CD8+T淋巴细胞计数无明显相关性。 5.肺结核患者CD4+T淋巴细胞表面PD-1的表达量与疾病类型（HR耐药或HR敏感）存在相关性。
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