摘要
目的：研究资木瓜总苷通过抑制肥大细胞活化，减少炎性因子产生，从而减轻对背根神经节神经细胞的活化作用，达到对类风湿关节炎（RA）关节镇痛的作用。 方法：（1）小鼠骨髓来源肥大细胞（mBMMC）的培养及鉴定：分离提取C57BL/6小鼠骨髓来源的细胞，诱导分化培养4周后，进行TB染色和电镜观察，鉴定为mBMMC。（2）小鼠背根神经节神经细胞（DRGn）的培养及鉴定：分离提取C57BL/6小鼠的脊髓背根神经节，酶解消化成单细胞后培养1周，进行免疫细胞化学和免疫荧光鉴定为DRGn。（3）CCK-8和MTT法检测不同浓度资木瓜总苷对mBMMC、RBL-2H3细胞和DRGn的毒性作用。（4）β-氨基己糖苷酶（β-Hexosaminidase）法检测mBMMC和RBL-2H3细胞活化脱颗粒情况。（5）建立共培养体系：组胺标准品与DRGn共培养，mBMMC与DRGn共培养，分别加入H1受体拮抗剂和TRPA1拮抗剂。（6）ELISA检测肥大细胞培养液中组胺（Histamine）含量、共培养体系中P物质（SP）和降钙素基因相关肽（CGRP）含量。（7）Westernblot检测DRGn的PLC-γ1蛋白和TRPA1蛋白的表达。 结果：（1）经过鉴定，所提取培养的原代mBMMC和DRGn纯度均达到90%以上。（2）细胞毒性检测，资木瓜总苷浓度在0.01-0.32mg/ml之间时对mBMMC、RBL-2H3细胞和DRGn几乎无毒性。（3）资木瓜总苷可显著降低经化合物C48/80刺激mBMMC和RBL-2H3细胞释放的β-Hexosaminidase的释放率（P＜0.01）。（4）资木瓜总苷可显著抑制mBMMC和RBL-2H3细胞释放Histamine的含量（P＜0.01）。（5）在组胺标准品与DRGn共培养中，随着Histamine浓度的增高，DRGn释放的神经肽SP也随之增高，而加入H1受体拮抗剂后，SP相应地减少（P＜0.05）。（6）在mBMMC与DRGn共培养体系中，分别加入资木瓜总苷、H1受体拮抗剂和TRPA1拮抗剂处理12h后，SP和CGRP的含量相应地减少，PLC-γ1和TRPA1蛋白表达量也减少（P＜0.05）。 结论：（1）资木瓜总苷浓度在0.01-0.32mg/ml之间对mBMMC的存活无影响，且随着药物浓度增高抑制肥大细胞活化脱颗粒。（2）Histamine能通过HR1呈浓度依赖性地引起DRGn释放SP。（3）资木瓜总苷可能是通过抑制MC-Histamine-HR1-TRPA1-DRG途径发挥类风湿关节炎镇痛作用。
NETL