摘要
目的: 探讨PACAP对HIBD的保护作用及有效剂量，以期为临床治疗新生儿HIE提供有效的方法和途径。 方法: 1．制备HIBD模型将60只新生7日龄SD大鼠随机分为假手术(sham)组、缺氧缺血(HI)对照组和PACAP治疗组，PACAP治疗组按给药剂量分为3个小组：PACAP-H(10-8mol)、PACAP-M(10-9mol)和PACAP-L(10-12mol)。新生大鼠行颈部正中切口，分离结扎左侧颈总动脉后给予低氧(8%O2，92%N2)处理2小时，制成HIBD模型，sham组仅分离左侧颈总动脉，不结扎，不低氧处理。其余两组于HI前15min于侧脑室注射生理盐水或PACAP。所有新生鼠于HI后24h处死。 2．行为能力检查分别于手术前及缺氧后1小时对每只新生大鼠进行翻身能力、夹尾左旋测试。 3．脑大体形态检查处死时观察每只新生大鼠脑组织的大体形态。 4.SOD、MDA、caspase-3基因表达及XIAP基因表达测定以新生鼠HIBD后24h损伤侧脑组织为标本，应用黄嘌吟氧化酶法测定SOD，应用改良的硫代巴比妥酸法测定MDA，应用荧光定量RT-PCR检测caspase-3mRNA和XIAPmRNA的表达。 结果: 1.行为能力检查术前每只大鼠均做翻身能力、夹尾左旋测定，60只全部正常。术后Sham组测定结果同前。HI对照组和PACAP治疗组的共48只大鼠，12只不能翻身，18只出现夹尾左旋，还有18只表现不能翻身和夹尾左旋同时存在。 2．脑大体检查新生大鼠HIBD后HI对照组结扎侧半球脑组织受损严重，在24h时苍白、水肿明显，体积明显大于对侧，PACAP治疗组大鼠未见上述改变或仅见结扎侧脑半球轻微的水肿；sham组大鼠大脑半球左右对称，未见任何病理变化。 3．SOD及MDA表达检测结果HIBD后24h，HI对照组MDA比sham组显著增高(p＜0.01)，HI对照组SOD比sham组显著降低(p＜0.01)；PACAP治疗组各剂量组MDA比HI对照组均显著减少(p＜0.01)，PACAP治疗组各剂量组SOD比HI对照组均显著回升(p＜0.01)。 4.caspase-3mRNA及XIAPmRNA表达检测结果HIBD后24h，HI对照组caspase-3mRNA的表达和XIAPmRNA的表达均比sham组显著增高(p＜0.01)；PACAP治疗组各剂量组caspase-3mRNA的表达均比HI对照组显著减少(p＜0.01)；PACAP治疗组各剂量组XIAPmRNA的表达均比HI对照组显著增加(p＜0.01)。 结论: 1．新生大鼠HIBD模型制作成功。 2．SOD、MDA、caspase-3及XIAP参与HIBD的发病机制：新生大鼠HIBD后MDA表达增高，SOD活力降低，证实存在自由基的损伤；caspase-3mRNA升高；证实存在细胞凋亡；XIAPmRNA升高，证实存着抗细胞凋亡的自身调节。 3.PACAP可能通过增加SOD，抑制MDA，上调XIAP．抑制caspase-3，减轻细胞凋亡而对HIBD发挥保护作用，且在高剂量(10-8mol)、中剂量(10-9mol)和低剂量(10-12mol)时均有效。为PACAP临床治疗新生儿HIE提供了理论依据。
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