摘要
石斛是我国历史悠久的名贵中药材，霍山石斛是石斛中的珍品，具有保肝护胃、增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗白内障和降血糖等多种生物活性。近年来野生霍山石斛资源短缺，通过人工种植霍山石斛的模式满足市场需求，但不同模式种植的对石斛药理效果的影响未见报道，故采用仿野生种植、林下石子种植和设施（大棚）种植的霍山石斛，利用westernblot法研究其对细胞色素P450酶表达的影响，并通过建立CCl4肝损伤、对乙酰氨基酚（APAP）肝损伤和环磷酰胺肝损伤三种肝损伤模型，研究不同模式种植的所得霍山石斛保肝活性的差异，为霍山石斛的产业开发及临床安全合理用药提供依据。主要研究内容及结论如下： 1.三种模式种植的霍山石斛对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用本研究采用经典的CCl4肝损伤模型评价三种模式种植的霍山石斛的保肝活性，其损伤机制与脂质过氧化相关。实验结果表明，各石斛给药组能不同程度降低小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷丙转氨酶（AST）水平，提高超氧化物歧化酶（SOD）活性，抑制丙二醛（MDA）含量升高。不同模式种植的霍山石斛保肝效果存在差异，仿野生种植和林下石子种植的霍山石斛保肝效果较好，其中林下石子种植的霍山石斛保肝效果最为显著。 2.三种模式种植的霍山石斛对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用APAP是一种常见的解热镇痛消炎药，但长期用药、联合用药或盲目大量用药会引起肝毒性,甚至急性肝衰竭，损伤机制与其中间代谢产物不可逆地结合大分子相关。本研究建立APAP肝损伤模型来评价三种模式种植的霍山石斛对APAP所致肝损伤的保肝活性差异。结果表明，三种模式种植的所得的霍山石斛均能抑制小鼠肝脏ALT、AST活性及MDA含量升高，提高SOD活性与谷胱甘肽（GSH）含量。仿野生模式种植和林下石子种植的霍山石斛对APAP肝损伤小鼠保肝活性较好，其中林下石子种植的霍山石斛效果最好。 3.三种模式种植的霍山石斛对环磷酰胺致小鼠肝损伤的保护作用环磷酰胺是临床上治疗恶性肿瘤最常用的免疫抑制剂和抗肿瘤药物，具有广谱抗癌的药效。但其为非细胞周期特异性药物，中间代谢产物同样会损伤正常细胞DNA并诱导产生大量毒性自由基。本研究采用环磷酰胺肝损伤模型进一步评价三种模式种植的霍山石斛的保肝活性差异。实验结果显示，三种模式种植的霍山石斛能不同程度降低小鼠肝组织ALT、AST水平，提高SOD活性，但仅有仿野生模式种植的霍山石斛能够显著抑制小鼠肝组织MDA含量的升高，这可能与其特殊的生长环境导致某些成分含量高于其余两种模式种植的霍山石斛有关，但仍待进一步研究。 4.三种模式种植的霍山石斛对小鼠肝脏细胞色素P450酶主要亚型表达的影响课题组前期研究表明，霍山石斛对小鼠脏器没有毒性作用。使用westernblot法研究三种模式种植的霍山石斛对CYP1A2、CYP2B、CYP2C19、CYP2E1和CYP3A五种主要的细胞色素P450酶表达的影响。Westernblot结果显示仿野生模式种植的霍山石斛对CYP1A2与CYP3A存在显著的剂量依赖性的诱导，高剂量组对CYP2B存在显著的诱导；林下石子种植的霍山石斛高剂量组对CYP1A2与CYP2B存在显著的诱导，而低剂量组没有显著的诱导作用；设施种植的霍山石斛对CYP1A2与CYP2B存在显著的剂量依赖性的诱导。
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