摘要
真菌毒素作为现阶段影响中药质量安全的主要外源污染物之一，不仅严重影响了中药的质量，而且对临床患者产生了潜在的健康隐患。由于真菌毒素在自然环境中存在高污染率，且难以天然降解，一旦产生可能会在宿主中不断积累，并通过食物链途径在动物和人体内蓄积和传递。体内长期蓄积可导致严重肝肾功能损害、致癌、致畸等巨大毒性危害，严重影响人体健康。因此，建立高灵敏、高通量、多毒素同步快速检测方法，有效监测体内外真菌毒素污染水平，开展真菌毒素污染预警减少人群暴露风险，推动真菌毒素污染防控，对保障中药质量及用药安全具有重要现实意义。因此，本论文基于真菌毒素的体内外暴露评估需求，主要开展如下研究： 1.建立易污染酸枣仁中黄曲霉毒素残留分析方法并开展其健康风险暴露研究 通过分析来自全国不同地区72批酸枣仁中黄曲霉毒素（aflatoxins,AFs）残留情况，对由服用酸枣仁途径摄入AFB1健康风险进行概率评估。采用IAC-HPLC-FLD法检测72批酸枣仁样品中AFs污染情况，结合样品污染水平，基于MonteCarlo模拟法结合污染数据建立暴露评估模型，采用暴露限值法（marginofexposure,MOE）对酸枣仁中黄曲霉毒素污染进行健康风险评估。结果显示，72批酸枣仁样品中44.4%（32批）检出含有AFB1，样品中平均污染水平为5.42μg/kg，最高污染水平为55.09μg/kg，污染水平分布无明显地域差异。经计算通过服用酸枣仁途径摄入AFB1的日暴露量平均值、97.5%分位（90%置信区间）分别为0.0086（0.0081~0.0092）、0.0573（0.0532~0.0614）μg/（kg?d）。健康风险评估结果显示，通过服用酸枣仁致AFB1暴露的健康风险较低，但高摄入人群的风险要高于常规摄入人群，需要引起关注，本研究可为酸枣仁临床用药安全评估提供参考。 2.建立血浆中10种真菌毒素的UFLC-MS/MS检测方法 利用高灵敏UFLC-MS/MS技术，通过对提取溶剂、色谱、质谱条件优化，建立了可同时检测人体血浆样本中10种常见真菌毒素（黄曲霉毒素B1（AFB1）、黄曲霉毒素B2（AFB2）、黄曲霉毒素G1（AFG1）、黄曲霉毒素G2（AFG2）、黄曲霉毒素M1（AFM1）、赭曲霉毒素A（OTA）、伏马毒素B1（FB1）、伏马毒素B2（FB2）、呕吐毒素（DON）、玉米赤霉烯酮（ZEN））污染水平的方法。结果显示，10种常见真菌毒素在各自线性范围内线性关系良好，相关系数R2均大于0.998，检测限为0.03ng·mL-1~0.2ng·mL-1，定量限为0.06ng·mL-1~0.4ng·mL-1，平均回收率在76.50%~114.0%。鉴于临床样本比较珍贵，在获得足够灵敏度和准确度的前提下，降低检测样本量是生物样品分析的关键，该法通过浓缩操作，实现了样本量仅需100μL即可，前处理操作简便、成本低、检测耗时短，可为高通量检测其他体内样本中多种真菌毒素提供参考。 3.不同人群体内真菌毒素生物标志物内暴露研究 基于建立的高通量UPLC-MS/MS方法，检测500份人体血浆样本包括不同人群（孕妇、肝癌患者、服用中药人群）中10种常见真菌毒素生物标志物含量。结果表明：孕妇、肝癌患者、服用中药人群三类人群体内均有OTA检出，其他9种真菌毒素生物标志物均无检出。三类人群中OTA的暴露水平平均值分别为0.57μg·L-1，0.30μg·L-1和0.36μg·L-1；60岁以下服用中药的男性检出率最高（47.83%），孕妇检出率最低（9.7%），人群间的暴露水平差异与性别、年龄、人群分类均无显著性关联（P＞0.05）。服用中药、孕妇和肝癌患者三类人群的（provisionaldailyintake，PDI）暴露量范围为0.017-0.325μg/kg·bw/day，最大值出现在孕妇样本中为0.325μg/kg·bw/day；孕妇群体中约3.0%的人体内OTA含量超过暂定每日最大摄入量（ProvisionalMaximumTolerableDailyIntake，PMTDI），另有约1.54%肝癌患者超过PMTDI；服用中药人群的PDI值均未超过PMTDI。由此可见孕妇是三类人群中高风险群体，需要引起重视。
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