摘要
目的：测定磷霉素对临床分离KPC-KP的最低抑菌浓度(MIC)。在此基础上测定磷霉素联合多黏菌素E、替加环素对KPC-KP的联合药敏及时间杀菌曲线，评价磷霉素联合多黏菌素E、替加环素对KPC-KP的抗菌效果。根据耐药突变选择窗(MSW)理论，测定磷霉素、多黏菌素E、替加环素单药及磷霉素分别联合两药的防突变浓度，测定联合用药防止耐药发生能力。初步探究KPC-KP对磷霉素的耐药机制。 方法：(1)使用琼脂平板倍比稀释法测定磷霉素对70株KPC-KP的MIC。(2)选取对磷霉素敏感的KPC-KP菌株，使用琼脂平板倍比稀释法测定多黏菌素E、替加环素对25株KPC-KP的MIC，使用微量棋盘稀释法测定磷霉素分别联合多黏菌素E、替加环素的联合药敏，计算FIC。根据各药MIC及药代动力学，测定并绘制磷霉素、多黏菌素E、替加环素及磷霉素分别联合多黏菌素E、替加环素对6株KPC-KP的时间杀菌曲线。(3)根据前部分研究结果，使用琼脂平板倍比稀释法测定磷霉素、替加环素、多黏菌素E及联合用药对10株对磷霉素敏感KPC-KP的防突变浓度(MPC)。(4)使用PCR技术提取并测定耐药突变菌株MurA、uhpT、glpT基因，将临床耐药菌、临床敏感菌、体外实验筛选耐药菌进行对比。 结果：临床分离的70株KPC-KP对磷霉素敏感率为35.71％。联合药敏显示磷霉素联合多黏菌素E时，FIC≤0.5占20％，0.5＜FIC＜1占52％，FIC=1占16％，1＜FIC≤2占12％，磷霉素联合替加环素时，FIC≤0.5占8％，0.5＜FIC＜1占64％，FIC=1占20％，1＜FIC≤2占8％,未见FIC＞2。时间杀菌曲线磷霉素联合多黏菌素E、替加环素杀菌效果优于单药，磷霉素联合多黏菌素E可完全清除细菌。测定磷霉素、多黏菌素E、替加环素对KPC-KP的MPC，磷霉素为＞2048mg/L，多黏菌素E为64至256mg/L，替加环素为4至32mg/L。磷霉素联用多黏菌素E、替加环素后MPC稍有下降。MPC筛选出磷霉素耐药突变菌可见MurA、uhpT、glpT基因突变。 结论：(1)临床分离的70株KPC-KP对磷霉素有一定的抗菌活性。(2)联合药敏结果提示磷霉素与多黏菌素E、替加环素对大部分KPC-KP菌株呈协同作用，对部分菌株呈相加或无关作用，无拮抗作用。时间杀菌曲线发现磷霉素联合多黏菌素E或替加环素杀菌效果优于单药。(3)磷霉素、多黏菌素E、替加环素单药MPC高于血药浓度，MSW过宽，单独应用易出现耐药。磷霉素联合多黏菌素E或替加环素时，MPC下降不明显，联合用药限制耐药效果不理想。(4)KPC-KP对磷霉素的耐药与MurA、uhpT、glpT基因突变相关，上述基因突变可能影响细菌正常功能。
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