摘要
在畜牧生产中，抗生素常常被用于治疗和预防动物疾病、提高饲料转化率和促进动物生长等，随之而来的是细菌的耐药性和抗生素被大量滥用等问题。因此，畜牧生产中抗生素的合理使用受到广泛关注。目前，养猪业中抗生素的大量使用甚至滥用情况仍较普遍，这使得猪源大肠杆菌耐药形势日趋严峻。猪源大肠杆菌已成为重要的耐药细菌贮存库，这些耐药菌株有可能通过污染的环境、动物之间的直接接触或食物等在养殖场内传播。致病性大肠杆菌是引起新生仔猪腹泻、断奶仔猪腹泻及水肿病、母猪乳房炎、母猪尿路感染的重要病原之一。因此，了解猪场大肠杆菌的耐药性情况，并通过改善猪舍内环境，以降低耐药菌株和耐药基因的传播，进而降低大肠杆菌疾病的发生在生产中具有重要的意义。 研究以粤东地区某大型规模化猪场为试验基地，选择怀孕90天左右的母猪40头，平均分成2组，20头/组，对照组母猪仍然生活在常规生产管理条件下的圈舍；实验组母猪则转移到距离较近的经过严格消毒的猪舍。采集产前一周对照组、实验组母猪粪便和母猪舍污水、出生后3~5天仔猪粪便，并分离其中的大肠杆菌，通过K-B法检测两组大肠杆菌，并对6类抗生素（β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类、磺胺类）中的14种药物的耐药性进行比较，以了解不同环境条件下大肠杆菌的分布及耐药性情况，为猪场消毒和正常的饲养管理方案设计提供依据；另外，研究进一步用PCR方法检测了猪场使用较多的喹诺酮类药物耐药的大肠杆菌中PMQR基因的分布情况；最后对耐喹诺酮类药物大肠杆菌通过ERIC-PCR分型，分析耐喹诺酮类药物大肠杆菌的流行和分布。研究结果如下： （1）利用麦康凯平板、16S-PCR方法共分离鉴定到261株大肠杆菌。通过对照组、实验组中母猪粪便、污水、仔猪粪便分离的大肠杆菌对相同药物的耐药率比较，结果对照组的耐药率趋势高于实验组，说明实验组母猪在转入新的栏舍后耐药性会相应的降低。2个组中母猪-污水-仔猪三者耐药率的平均值中，实验组氨基糖苷类药物中的庆大霉素、阿米卡星和喹诺酮类药物中的环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星都有比较明显的变化，这5种药物中对照组耐药率分别为53.82%、54.73%、49.58%、42.12%、46.15%；实验组耐药率分别为36.00%、40.59%、36.11%、30.29%、32.02%。 （2）用PCR方法检测喹诺酮类药物耐药的大肠杆菌中耐药基因（PMQR）的分布情况，结果表明，对照组的污水大肠杆菌中oqxAB、qnrS、aac(6’)-Ib-cr的阳性检出率最高，分别为34.62%（9/26）、7.69%（2/26）、38.46%（10/26）；qnrB的阳性检出率中对照组和实验组仔猪阳性检出率最高，分别为5.81%（5/86）和5.66%（3/53）；qepA的阳性检出率中实验组污水检出阳性率最高，为5.26%（1/19）；对于喹诺酮类药物常见的耐药基因oqxAB、aac(6’)-Ib-cr都是对照组的污水检出率最高。 （3）本研究对92株耐喹诺酮类药物的大肠杆菌进行ERIC-PCR分型分析，结果可以分为多个不同的型，其中有A-T的20种型是取相似度大于90%，对照组和实验组都出现了菌株的水平传播和克隆传播，相对于对照组来说，实验组的耐药菌株数出现水平和克隆传播小于对照组，说明环境的改变使母猪的体内耐药菌株减少，使污水中耐药菌株也相对减少，从而使仔猪从母猪体内生下来获得和接触母猪、污水中的耐药菌株概率减小，大大的降低了仔猪的耐药性和耐药菌株的传播。
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