摘要
树皮小蠹和蛇口壳目类真菌经过长期的协同进化，大部分形成了互惠互利的伴生关系，涵盖了昆虫对真菌的识别、昆虫和真菌的特异化、对真菌的携带和传播等很多方面的内容，这是一个动态全面的复杂过程。二者的互惠共生关系不仅促进了树皮小蠹更好地繁殖发展、占领新的生境，也促进了真菌的传播。 本项目主要采用传统微生物学和现代分子生物学相结合的方法，对云南省昆明、丽江、大理、楚雄、香格里拉五地区横坑切梢小蠹的伴生蛇口壳目真菌进行深入研究，主要涉及伴生真菌的物种资源多样性、伴生真菌的形态学观察和分子鉴定、蛇口壳目类真菌的DNA条形码的筛选与评价三个方面。本项目于2017年8月在云南省五地区采集病疫木材和昆虫样品，并将其用采集袋封存转移至实验室进行分离纯化。原始分离平板达到254个，经过纯化得到纯净菌株400株。提取400株菌的DNA，并且扩增ITS基因序列片段，测序后确定涉及50个属，包含蛇口壳目类真菌6个属，共112株菌：Ceratocystiopsis、Graphilbum、Leptographium、Ophiostoma、Raffaelea、Sporothrix，占所有种属的28%。通过对蛇口壳属Opiostoma进行深入的分子研究，基于多基因：ITS、BT2、TEF的测序和系统发育分析，采用最大似然法（MaximumLikelihood，ML）构建系统发育树确定了5个蛇口壳属的疑似新种：YML185、YML208、YML209、YML210、YML212。形态学观察均发现了5菌株的产孢结构，YML208、YML210观察到了有性形态结构，YML185、YML209和YML212观察到了无性形态结构。综合分子系统发育和形态学观察的结果，对5个新种菌株进行描述报道。通过对云南地区的横坑切梢小蠹的伴生真菌的研究，初步明确了伴生真菌的物种多样性和优势种类，为云南地区横坑切梢小蠹的防治、蛇口壳目类真菌的了解和虫菌伴生关系提供了理论基础，也为该地区病虫害的检疫和监测等工作指明探究的方向和防治思路。
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