摘要
目的 探讨中药单体山奈酚对急性肝衰竭模型小鼠的保护作用及相关机制。 方法 选用雄性C57BL/6小鼠,D-氨基半乳糖（D-GalN，700mg/kg)联合脂多糖（LPS，10μg/kg）经腹腔注射给药，6小时可建立急性肝衰竭模型。动物实验组分为：正常对照组、模型组D-GalN/LPS、山奈酚组（在D-GalN/LPS造模前两小时，给予山奈酚5mg/kg，尾静脉注射）、空白小干扰RNA组（在D-GalN/LPS造模前两小时，给予山奈酚5mg/kg和空白小干扰RNA3mg/kg，尾静脉注射）、Grp78小干扰RNA组（在D-GalN/LPS造模前两小时，给予山奈酚5mg/kg和Grp78小干扰RNA3mg/kg，尾静脉注射）。正常组小鼠设为15只，其余各组均设为20只。HE染色实验观察肝脏组织病理学改变、检测血清丙氨酸转移酶（ALT）和天冬氨酸转移酶（AST）水平、qRT-PCR和免疫印迹法检测内质网应激和凋亡相关因子（Grp78、CHOP、Caspase-3、CleavedCaspase-3）表达水平。此外，选用内质网应激诱导剂衣霉素（TM）和毒胡萝卜素（TG）刺激小鼠原代肝细胞促使其发生内质网应激反应，细胞实验分组：正常对照组、模型组（TM，20μg/ml，24h）/（TG，2μg/ml，12h）、山奈酚不同剂量干预组，检测细胞上清液中LDH含量、MTT法检测细胞活性、流式细胞术检测细胞凋亡状况、qRT-PCR和免疫印迹法对内质网应激及凋亡相关因子的表达进行检测。 结果 动物实验表明，山奈酚处理组血清AST、ALT和肝细胞凋亡水平均显著低于D-GalN/LPS模型组，肝组织病理损伤亦有明显改善。后续研究证实山奈酚主要通过调节内质网应激相关因子Grp78和CHOP的表达，抑制了肝细胞凋亡，从而对急性肝衰竭模型小鼠起到保护作用。同时，细胞实验结果表明，与TM、TG模型组相比，加入低、中剂量型山奈酚（0.01μM、0.1μM、1μM、10μM）后，显著抑制了内质网应激所诱导的小鼠原代肝细胞凋亡，高浓度山奈酚（100μM）反而促进了小鼠原代肝细胞凋亡。此外，通过进行MTT、细胞上清LDH含量、以及凋亡蛋白和内质网应激相关蛋白表达的检测，均证实了低、中浓度山奈酚可抑制由内质网应激所诱发的肝细胞损伤。 结论 急性肝衰竭可诱发严重的内质网应激反应进而出现大量的肝细胞凋亡及坏死。中药单体山奈酚对急性肝衰竭模型小鼠生存率、肝脏病理损伤、肝功能均有显著改善作用，山奈酚组凋亡因子CHOP、Caspase-3、CleavedCaspase-3的表达均显著低于模型组，而内质网应激标志因子Grp78则高于模型组（p<0.05）。同时，当诱导小鼠原代肝细胞发生内质网应激时，低、中浓度山奈酚可抑制细胞的损伤与凋亡，高浓度山奈酚促进了细胞损伤。综上所述，山奈酚可通过调控内质网应激相关因子Grp78、CHOP的表达抑制细胞损伤，对急性肝衰竭模型小鼠具有治疗作用。
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