摘要
目的：肝纤维化是机体对各种肝损伤因素长期入侵的一种修复应答反应，属于早期病变，尚可逆转。若不尽早的治疗，肝纤维化可进展为不可逆的肝硬化阶段，甚至恶变为肝癌，导致病人死亡。秦皮素是从传统中药秦皮中提取出来的香豆素类单体化合物，具有抗菌、抗氧化和抗肿瘤等多种药理学活性。目前研究表明秦皮素具有良好的保肝和抗肝纤维化作用，但是相关的分子机制并不清楚。因此，本研究旨在进一步明确秦皮素的抗肝纤维化作用，同时阐明其分子机制。 方法：将48只成年雄性SD大鼠随机均分为正常对照组、模型组、秦皮素低剂量(25 mg/kg)和高剂量组(50 mg/kg)。除正常对照组外，其余三组大鼠均给予50%CCl4花生油溶液灌胃(1 ml/kg)建立肝纤维化模型，每周两次。秦皮素给药组分别灌胃给予秦皮素25mg/kg与50mg/kg，每天一次，整个建模与给药周期持续8周。8周后处死大鼠，收集血清和肝脏样本。(1)全自动生化分析仪检测大鼠肝功能指标(AST、ALT、TBIL)，放射免疫法检测肝纤维化四项指标(HA、LN、Ⅳ-C、PⅢNP)；(2)HE和Masson染色考察大鼠肝组织病理改变和胶原沉积程度；(3)免疫组织化学与荧光染色检测MAPKs、Bcl-2/Bax信号通路关键蛋白和α-SMA的表达水平；(4)Westernblot检测大鼠肝组织NF-κB/IκBα、MAPKs、Bcl-2/Bax信号通路关键蛋白和α-SMA的表达水平；(5)Real-timePCR检测相关炎症因子、HSCs激活标志物和ECM调控因子mRNA的表达水平。 结果:1.秦皮素可明显改善肝纤维化大鼠生活状态，并降低肝指数；2.血清学检测结果说明秦皮素可显著降低肝功能指标(AST、ALT、TBIL)和纤维化指标(HA、LN、Ⅳ-C、PⅢNP)；3.肝组织病理学结果显示秦皮素可减轻肝纤维化大鼠肝脏的炎症损伤和胶原沉积；4.免疫组织化学和荧光染色结果显示：(1)秦皮素给药后，肝纤维化大鼠肝组织中p-p38MAPK、p-JNK和p-ERK表达明显减低；(2)秦皮素给药后，肝纤维化大鼠肝组织中Bcl-2表达显著升高，Bax表达明显降低；(3)秦皮素干预后，肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA表达明显减低；5.Westernblot结果显示：(1)秦皮素可通过抑制肝纤维化大鼠肝细胞质中IκBα磷酸化阻止NF-κB入核；(2)秦皮素可显著抑制肝纤维化大鼠肝组织p38MAPK、JNK、ERK磷酸化；(3)秦皮素能够上调肝纤维化大鼠肝组织中Bcl-2/Bax的表达，抑制CleavedCasepase-3表达；(4)秦皮素能够显著降低肝纤维化大鼠肝组织中HSCs激活标志蛋白α-SMA的表达；6.Real-timePCR结果显示：秦皮素给药后，肝纤维化大鼠肝组织中炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2、TGF-β)，HSCs激活标志物(α-SMA、Vimentin、Desmin)和胶原调控因子(TIMP-1、CollaⅠ、CollaⅡ)的基因表达水平显著降低，MMP-1则显著升高。 结论：秦皮素能够通过改善大鼠肝脏炎症和肝细胞凋亡，同时抑制HSCs激活，进而逆转CCl4诱导的大鼠肝纤维化，其抗纤维化机制可能与调节NF-κB/IκBα、MAPKs和Bcl-2/Bax信号通路密切相关。
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