摘要
目的： 1.观察pannexin1通道蛋白在睾丸细胞中的表达。 2.明确pannexin1通道对睾丸癌I-10细胞侵袭迁移的作用及可能机制。 方法： 1.Westernblotting法检测睾丸间质细胞TM3和睾丸癌I-10细胞中pannexin1蛋白表达。 2.Pannexin1通道抑制剂甘珀酸(CBX)和丙磺舒(PBN)作用睾丸癌I-10细胞后，使用实时荧光传递法和细胞外ATP检测法检测CBX和PBN对pannexin1通道功能的抑制作用；transwell法和细胞划痕法检测CBX和PBN对睾丸癌I-10细胞侵袭迁移的抑制作用；westernblotting法检测侵袭迁移相关蛋白vimentin、E-cadherin和MM-9的表达。 3.分子生物学沉默(shRNA)和过表达pannexin1(mPanx-1)后，使用实时荧光传递法和细胞外ATP检测法检测shRNA和mPanx-1分别抑制和增强pannexin1通道功能；transwell法和细胞划痕法检测shRNA对睾丸癌I-10细胞侵袭迁移的抑制作用和mPanx-1增强睾丸癌I-10侵袭迁移能力；westernblotting法检测侵袭迁移相关蛋白vimentin、E-cadherin和MM-9的表达。 4.在shRNA和mPanx-1稳转细胞株中，使用U0126(p-ERK抑制剂)抑制p-ERK的表达后，transwell法和细胞划痕法检测U0126对shRNA和mPanx-1稳转细胞株细胞侵袭迁移的抑制作用；westernblotting法检测侵袭迁移相关蛋白vimentin、E-cadherin和MM-9的表达。 结果： 1.与睾丸间质细胞TM3相比，睾丸癌细胞中pannexin1蛋白表达量显著增多。 Westernblotting结果显示，相比睾丸间质细胞TM3，睾丸癌细胞Tcam-2、MLTC-1以及I-10中pannexin1表达量明显增高(P＜0.05)。 2.CBX和PBN抑制pannexin1通道后，pannexin1通道功能下降。 实时荧光传递实验发现：与control组相比，使用pannexin1通道抑制剂CBX和PBN后，细胞荧光传递能力明显下降(荧光传递强度反应pannexin1通道强弱)((P＜0.05)；细胞外ATP检测实验(细胞外ATP水平高，pannexin1通道功能强)发现，与control组相比，使用CBX和PBN抑制pannexin1通道后，细胞外ATP含量明显降低(P＜0.05)。 3.CBX、PBN抑制pannexin1通道后，睾丸癌I-10细胞侵袭迁移能力下降。 Transwell和划痕结果表明：与Control组相比，CBX组和PBN组的迁移能力降低(P＜0.05)；侵袭能力降低(P＜0.05)。促侵袭迁移蛋白MMP-9和vimentin表达量降低(P＜0.05)；抑侵袭迁移蛋白E-cadherin表达量升高(P＜0.05)。 4.沉默Panx-1可降低睾丸癌I-10细胞侵袭迁移能力。 实时荧光传递实验发现：沉默Panx-1基因后，睾丸癌I-10细胞中pannexin1通道功能变弱(P＜0.05)；ATP检测结果发现细胞外ATP水平降低(P＜0.05)；transwell和细胞划痕实验发现沉默Panx-1后，睾丸癌细胞I-10侵袭迁移能力降低(P＜0.05)。Westernblotting结果发现：促侵袭迁移蛋白MMP-9和vimentin表达量降低(P＜0.05)；抑侵袭迁移蛋白E-cadherin表达量升高(P＜0.05)。 5.过表达Panx-1增强睾丸癌I-10细胞侵袭迁移能力。 实时荧光传递实验发现：过表达Panx-1基因后，睾丸癌I-10细胞中pannexin1通道功能变强(P＜0.05)；ATP检测结果发现细胞外ATP水平增强(P＜0.05)；transwell和细胞划痕实验发现过表达Panx-1后，睾丸癌细胞I-10侵袭迁移能力增强(P＜0.05)；westernblotting结果：促侵袭迁移蛋白MMP-9和vimentin表达量升高(P＜0.05)；抑侵袭迁移蛋白E-cadherin表达量降低(P＜0.05)。 6.在过表达Panx-1细胞株中，mPanx-1增强睾丸癌细胞侵袭迁移能力，U0126(p-ERK抑制剂)能显著降低过表达株细胞侵袭迁能力。 Transwell和划痕实验发现，在过表达Panx-1基因细胞株中，与NC组和mPanx-1组相比，U0126+mPanx-1组能显著抑制睾丸癌细胞侵袭迁移(P＜0.05)；westernblotting实验发现，U0126+mPanx-1能显著抑制MMP-9和vimentin蛋白的表达，增强E-cadherin蛋白的表达(P＜0.05)。 结论: 1.Pannexin1通道蛋白在睾丸癌I-10细胞中表达量增加。 2.Pannexin1通道促进睾丸癌I-10细胞侵袭迁移可能与增强p-ERK1/2蛋白的表达有关。
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