摘要
目的:海兔素是由本实验室从三列凹顶藻中分离纯化的一种溴代倍半萜，本实验通过观察海兔素对酒精性肝损伤（alcoholicliverdisease，ALD）大鼠白介素-2（IL-2）、白介素-10（IL-10）、CD4+T细胞、CD8+T细胞及干扰素-γmRNA（IFN-γmRNA）表达的影响，为进一步阐明海兔素对酒精性肝损伤大鼠的免疫调节作用机制提供实验依据。 方法： 1.动物分组及模型建立：两月龄健康雄性wistar大鼠50只，适应性喂养一周后，按体重随机分为正常对照组、酒精模型组、海兔素低、中、高剂量组5组，每组10只。正常对照组，每日给予生理盐水灌胃1次；酒精模型组，每日给予50%的乙醇8ml/（kg·bw·d）灌胃，2w后乙醇剂量增至12ml/（kg·bw·d），继续灌胃4w；海兔素低、中、高剂量组每日分别给予海兔素灌胃，剂量分别为：50、100、150mg/（kg·bw·d），1h后灌酒精，灌胃量与酒精模型组相同。实验共进行6w。末次灌胃12h后，称重后给予7%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血并留取肝脏、脾脏。 2.计算脾指数。 3.肝脏病理学检查：HE染色观察大鼠肝脏组织的病理学改变。 4.采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测大鼠血清中IL-2、IL-10的含量，并计算IL-2/IL-10比值。 5.免疫组化法检测肝组织中CD4+、CD8+T细胞表达，计数CD4+、CD8+T细胞，并计算CD4+/CD8+T细胞比值。 6.采用实时定量PCR法检测大鼠肝组织中IFN-γmRNA的表达。 结果： 1.海兔素中剂量组及海兔素高剂量组的脾指数分别为（0.205±0.173），（0.196±0.189），均低于酒精模型组（0.254±0.092），差异有统计学意义（P<0.05）。 2.HE染色观察结果，酒精模型组大鼠肝小叶结构模糊，肝细胞排列紊乱，胞浆空泡化，出现明显的脂肪变性，可见炎性细胞浸润；与酒精模型组相比，海兔素各剂量组肝细胞坏死程度明显减轻。 3.海兔素对酒精性肝损伤大鼠IL-2、IL-10、CD4+T细胞、CD8+T细胞的影响与正常对照组相比，酒精模型组血清中IL-2含量显著升高，IL-10含量降低，IL-2/IL-10比值升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）；海兔素各剂量组与酒精模型组相比IL-2含量降低，IL-10含量升高，IL-2/IL-10比值降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。与正常对照组相比，酒精模型组肝组织CD4+T细胞表达升高，CD8+T细胞表达降低，CD4+/CD8+T细胞比值升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）；海兔素各剂量组与酒精模型组相比CD4+T细胞表达降低，CD8+T细胞表达升高，CD4+/CD8+T细胞比值降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中，随着海兔素剂量的增加，IL-2、CD4+T细胞表达逐渐降低，且呈剂量依赖关系（P＜0.05）；而CD8+T细胞表达逐渐升高，低剂量组与中、高剂量组间差异有统计学意义（P＜0.05）；IL2/IL-10比值逐渐降低，其中低、高剂量组间差异有统计学意义（P＜0.05）。 4.海兔素对酒精性肝损伤大鼠肝脏IFN-γmRNA表达的影响 Real-timePCR的结果显示，酒精模型组与正常对照组相比，IFN-γmRNA表达升高（P＜0.05）；海兔素各剂量组与酒精模型组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05），且随着海兔素剂量的增加，IFN-γmRNA表达逐渐下降，其中，海兔素低剂量组与海兔素高剂量组相比IFN-γmRNA相对表达量有统计学意义（P＜0.05），但与海兔素中剂量组相比没有统计学差异(P＞0.05）。 结论： 1.根据对ALD大鼠肝组织病理学改变的观察，初步证明了海兔素干预可以有效的改善酒精对大鼠肝脏的损伤。 2.海兔素对ALD大鼠的免疫调节作用可能与：（1）抑制促炎因子IL-2及CD4+T细胞的表达（2）促进抗炎因子IL-10及CD8+T细胞的水平（3）降低IFN-γmRNA的相对表达量有关。
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