摘要
背景：乙肝病毒（hepatitisBvirus,HBV）是一种嗜肝病毒，侵犯人体后可引起乙型肝炎。中国是乙肝大国，乙肝表面抗原（HbsAg）携带率高达10%-15%。不孕症患者中的HBV感染率并不低于正常人群。HBV感染是否影响人工助孕的妊娠结局及其影响机制成为重要的研究课题。乙肝的传播方式多样，但经生殖细胞传播是唯一真正意义上的垂直传播。因此我们考虑，进入生殖细胞的HBV病毒有可能通过影响某些基因甲基化继而改变其表达状态，从而影响生殖细胞甚至胚胎的发育。近年来，动物实验证明了母性效应基因的存在和不可替代性。本研究收集HbsAg阳性及阴性ART患者外周血标本及病理资料，检测部分母性效应基因的甲基化状态，探索HBV感染对卵母细胞及胚胎发育的影响和具体作用机制，对HBV阳性ART患者进行早期干预提供实验基础和理论依据。 材料与方法：研究标本来自于2015年3月-2015年9月在青岛大学附属医院生殖医学科行IVF/ICSI-ET的患者。所有患者均经乙肝五项定量检查。收集患者的外周血标本，根据乙肝表面抗原（HBsAg）检测结果分为阳性标本(46例)及阴性标本（45例）。本次研究选择了3种与卵母细胞以及受精卵的发育、成熟息息相关的母性效应基因（GDF9、ZAR1、MATER），分别对其进行甲基化程度的检测。首先采用常规酚一氯仿一异戊醇法从外周血标本的淋巴细胞中提取DNA，然后对DNA进行重亚硫酸盐处理后行甲基化特异PCR(MSP)，PCR扩增产物用2%的琼脂糖电泳，紫外凝胶成像系统记录分析结果。采用X2检验对HBSAg阳性标本和阴性标本的GDF-9、ZAR-1及MATER基因启动子的甲基化状态进行统计学分析。同时本研究选取943个IVF/ICSI周期为研究对象，统计分析HBV感染对胚胎受精率、卵裂率、可移植胚胎率的影响。P＜0.05时差异有统计学意义。 结果：1.GDF9：当出现甲基化条带时，即判断该标本为甲基化标本。HbsAg阴性标本和阳性标本中GDF-9启动子基因甲基化检出率分别为88.88%(40/45)和100%(46/46)，差异有统计学意义，（X2=5.408，P=0.026）。2.ZAR1：HbsAg阴性标本和阳性标本中ZAR-1启动子基因甲基化检出率分别为24.44%(11/45)和45.65%(21/46)，差异有统计学意义（X2=4.487，P=0.028）。3.MATER：全部标本均单独出现甲基化条带，未出现非甲基化条带。HbsAg阳性组和阴性组在MATER基因启动子甲基化程度检测中表现无差异。4.ICSI周期阳性组卵裂率明显低于对照组（0.79，P＜0.01），差别具有统计学意义。 结论：1.HBV感染可能导致宿主细胞GDF9和ZAR1基因高甲基化，影响它们在宿主生殖细胞内的表达，继而可能影响卵母细胞和早期胚胎的发育。2.HBV感染对MATER的甲基化程度无影响。无论是否感染HBV，MATER基因均为高甲基化状态。这说明HBV并不对所有的母性效应基因都有影响。
NETL