摘要
植物病害防治历来以化学药剂为主，长此以往，给生产环境、生态平衡以及农产品质量带来一系列问题，而生物防治可以有效地缓解化学农药带来的诸多问题，利用微生物杀菌剂来代替化学农药，近年来已成为国内外研究热点。本研究以防治葡萄灰霉病的微生物杀菌剂为最终目标，着重开展葡萄灰霉病生防细菌的筛选、防效评价、发酵工艺优化等工作。利用先期实验室分离出的27株拮抗细菌，以灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)为指示病原菌，采用平板对峙法、离体叶片法、盆栽试验及田间试验等方法开展葡萄灰霉病高效生防细菌的筛选和防病评价;采用平板对峙法评价了其对5种常见林木病原菌的抑菌活性;利用摇瓶试验，从11种培养基中筛选到适合生防细菌生长的培养基;利用16S rDNA序列和Biolog微生物全自动鉴定分析系统对重要生防细菌进行了分类鉴定。主要研究结果如下: 1.利用平板对峙法测定了27株细菌对灰葡萄孢菌拮抗作用，明确这些供试株菌株均具有不同程度的拮抗作用，其中26株供试细菌的抑菌带≥8mm，抑菌率59.23％～76.74％。 2.利用离体叶片法对此27株拮抗细菌防治葡萄灰霉病的效果进行了评价。结果表明，防病效果≥70％的拮抗细菌有6个，HMB27636、HMB27637、HMB27648、HMB27667、HMB27688及HMB28023，防效达73.03％～81.26％。进一步对此6个生防细菌的使用浓度进行了研究，结果表明发酵液稀释倍数不高于4倍时，所有供试生防细菌对葡萄灰霉病均具有较好的防治效果(23.86％～93.43％)，在应用发酵液原液处理时防效最高，达到69.65％～93.42％，其中HMB28023菌株表现最好，防效达93.42％。 3.在夏黑和藤稔两个葡萄品种上，通过盆栽试验评价了HMB27636、HMB27637、HMB27667和HMB280234个生防细菌对葡萄灰霉病的防治效果。在夏黑上的防效分别为86.83％、54.23％、70.21％、92.08％;在藤稔上的防效分别为71.07％、68.53％、80.78％、76.19％。该结果表明HMB27636、HMB27667和HMB28023是具有潜力的生防菌株。 4.在维多利亚葡萄品种上，通过田间试验对HMB27636、HMB27637、HMB27667和HMB28023四个生防细菌对葡萄灰霉病的防治效果进行了评价。在应用发酵原液处理时，防治效果分别是90.31％、52.43％、79.76％、89.54％。 5.采用平板对峙法评价了上述6株生防细菌对苹果轮纹病菌（Botryospuaeria berengeriana）、油松枯梢病菌（Sphaeropsis sapinea）、杨树腐烂病菌（Valsa sordida）、核桃溃疡病菌（Dothiorella gregaria）和褐斑病菌（Cercospora insulana）的拮抗作用。结果表明6株供试生防细菌对以上林木病原菌表现出不同程度的抑制作用，对杨树溃疡病菌的拮抗作用尤其明显，抑菌带在16.00～20.00mm之间。该研究结果为中国林木病害生物防治提供了部分生防微生物资源。 6.以菌体生物量为评价指标，从11种培养基中筛选出了适合菌株HMB27636和HMB28023生长的培养基，分别为11号和2号培养基，菌含量分别达到11.81×108cfu/mL和21.03×108cfu/mL。 7.采用16S rDNA和Biolog微生物自动鉴定系统完成6株生防细菌的分类鉴定。结果表明，两种方法均表明HMB27636、HMB27667和HMB27688为解淀粉芽孢杆菌，16S rDNA方法鉴定HMB27637、HMB27648和HMB28023均属于芽孢杆菌属，Biolog方法鉴定分别为短小芽孢杆菌/安第斯芽孢杆菌、莫海威芽孢杆菌和短小芽孢杆菌/安第斯芽孢杆菌。
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