摘要
水蜜桃是我国著名的原产水果，在采摘、运输和贮藏期间极易遭受病原微生物的侵染，导致桃果实大量腐烂。研究表明拮抗酵母菌对果蔬的采后病害具有较好的防治效果，且不会对人体造成不利影响。本课题筛选得到一株能够有效抑制水蜜桃褐腐病的拮抗酵母菌，并对其主要生防机理进行研究，之后将其制成活性冻干粉应用在水蜜桃贮藏保鲜方面。本论文的主要研究内容如下： (1)从镇江市有机桃园分离得到87株酵母菌，通过体外初筛和体内复筛，得到一株可以有效抑制由美澳型核果链核盘菌(Monilinia fructicola)引起的水蜜桃褐腐病的拮抗酵母菌Y17；之后对Y17菌株进行形态学、生理学及分子鉴定，该菌株被认定为是间型假丝酵母菌(Candida intermedia)。通过小鼠急性经口实验，证明该菌株为实际无毒型酵母菌。 (2)通过水蜜桃体内实验，得到C.intermediaY17抑制M.fructicola的最佳浓度为1×108cells/mL；C.intermediaY17与病原菌孢子在PDB培养基共培养，发现C.intermediaY17能有效抑制M.fructicola孢子萌发；光学显微镜观察到C.intermediaY17能很好地吸附到病原菌菌丝上，从而抑制菌丝的生长；水蜜桃体内实验表明：C.intermediaY17能够诱导桃果实多酚氧化酶、抗坏血酸过氧化物酶、过氧化氢酶、苯丙氨酸解氨酶、β-1,3葡聚糖酶、几丁质酶等抗性酶活力的提高；通过平板倒扣实验，发现C.intermediaY17产生的挥发性物质能够抑制M.fructicola生长，采用气相色谱-质谱联用仪对挥发性成分进行分析，确定其主要成分有2-甲基丁醇、1-己醇、辛酸乙酯、异戊酸、苯乙醇等。 (3)通过转录组学分析M.fructicola对C.intermediaY17挥发性物质的应答变化，结果表明：C.intermediaY17产生的挥发性物质能够显著影响M.fructicola的代谢过程和细胞过程。RT-qPCR挑选验证的3个与病原菌生物膜合成(细胞色素P450单加氧酶、磷脂酰丝氨酸脱羧酶)以及免疫调节(谷胱甘肽S-转移酶)相关的基因，均出现下调；3个与病原菌能量代谢(ATP合成酶、己糖激酶、乙酰辅酶A水解酶)相关的基因，前两个为下调基因，后一个为上调基因；1个与病原菌细胞结构(β-1,3-葡聚糖酶)相关的基因表现为上调。 (4)对C.intermediaY17菌体离心条件进行优化，得到最佳参数为：6000r/min，15min；通过单因素试验对C.intermediaY17活性冻干粉保护剂进行初步筛选，发现海藻糖、谷氨酸钠和山梨醇这三种物质保护性能最好；之后通过响应面中心组合设计优化配方，发现山梨醇5.43g/100mL＋海藻糖12.45g/100mL＋谷氨酸钠13.56g/100mL组合保护效果最好，酵母存活率可达84.21%±0.87%；最后，对C.intermediaY17活性冻干粉生防效力和存放能力进行评价，结果表明：所制备的冻干粉仍具有较高的生防效力，且-20℃温度条件下更适宜菌粉保藏。 (5)将上述的活性冻干粉复水制成悬液，采用浸泡的方法施用于桃果实，研究该生防菌剂对水蜜桃采后贮藏保鲜的影响。结果表明，该菌粉制剂能够有效控制水蜜桃贮藏期间腐烂病害的发生，减少果实水分流失，并对桃果实的硬度、Vc含量、可溶性固形物含量、可滴定酸含量、总酚含量、类黄酮含量以及果皮细胞膜完整性均有一定的维持作用，对水蜜桃采后的贮藏保鲜具有积极保护作用，具有潜在的经济效益和社会意义。
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