摘要
橙皮素单葡萄糖苷(hesperetin-7-O-glucoside，HMG)是橙皮苷脱掉一分子鼠李糖后的产物，也是新橙皮苷二氢查尔酮这一新型甜味剂的前体物质，其生理活性和水溶性优于原料橙皮苷。本文研究了橙皮苷酶的酶学性质，优化了橙皮苷酶制备HMG的工艺，对HMG进行分离纯化并测定了HMG等酶解产物的抗氧化活性。主要研究结果如下： (1)采用高效液相色谱法(HPLC)测定了橙皮苷酶的酶活力及其酶学性质。结果表明橙皮苷总酶、α-L-鼠李糖苷酶及β-D-葡萄糖苷酶的酶活力分别为12.28、3.5和0.413U/g。且橙皮苷酶在20~70℃、pH3.0~7.0具有较好的稳定性，最适反应温度和pH分别为60℃和4.0；在最适温度和pH下，该酶的动力学常数Km为296.69μg/mL，最大反应速率Vm为0.8723μg/(mL·min)，且建立的液相色谱方法检测的精密度和准确度都较好，可用于HMG的定量检测。 (2)以橙皮苷的转化率和HMG的生成量为指标，分别考察了酶用量、增溶剂二甲基甲酰胺(DMF)添加量、葡萄糖浓度和橙皮苷浓度四个单因素对HMG制备过程的影响。在此基础上，以HMG的得率为指标，通过响应面试验建立了HMG的回归模型为Y=45.72-1.18A+0.35B+1.48C-0.76AB+0.08AC-0.29BC-3.74A2-1.92B2-3.55C2，该模型准确度高，可以用来预测一定条件范围内HMG的得率。 (3)采用大孔吸附树脂和半制备液相色谱法分离纯化酶解液中的HMG，优选出HPD300树脂进行酶解液的初步纯化，纯化后酶解液中三种主要黄酮类组分的纯度从80.37%提高到97.83%；在半制备液相进一步分离纯化下，得到单体HMG的纯度提高至98.21%，并通过紫外可见光谱(UV-Vis)、红外光谱(FTIR)、X射线衍射(XRD)和质谱(TOF-MS)确证产物为HMG。 (4)采用DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基、铁还原力和金属离子螯合力试验进行酶解产物和橙皮苷的体外抗氧化活性评价。结果表明橙皮苷、HMG和橙皮素均有一定的抗氧化作用，但三者的自由基清除能力均不及Vc，且在一定的浓度范围内三者对自由基的清除效果呈浓度依赖型。
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