摘要
本试验以RAPD技术为研究方法，对吉林省农科院畜牧分院42个供试品种进行了品种鉴定和分类地位的研究。结果表明： 采用CTAB改良法快速提取到了较高质量苜蓿基因组总DNA用于RAPD扩增，并在RAPD反应中筛选出19个10碱基随机引物，它们的多态性百分率大多在62.7%以上，确定了RAPD-PCR苜蓿最适反应体系为：模板DNA浓度为135ng/μL，Mg2+浓度为2．5mmol/L，TaqDNA聚合酶1U，dNTP的浓度为1.5mmol/L，10碱基引物浓度为15pmol，10×缓冲液浓度为2.5mmol/L，其余用重蒸馏水补充。扩增程序为：预变性94℃5min，变性94℃1min，退火40℃1min，延伸72℃1.5min，共40个循环；72℃最终延伸5min。 建立了42个品种的指纹图谱。找到了诺瓦苜蓿、甘农一号、Magna6013个品种的特征标记。42个品种中的CW-321、WL-323接种、WL-232HQ、朝阳苜蓿、菲尔兹、CW-340、金字塔、大叶苜蓿、辛普劳、WL-323ML、Ladak+、Magnum-Wet、CW-306、农宝、多叶苜蓿、霍普兰德、苜蓿王、兼用型、胜利者、得龙苜蓿、金钥匙、肇东苜蓿、公农一号、草原二号、敖汉苜蓿、熊一号、紫花苜蓿27个品种可以用一个引物的两条带和其它品种区分开。 对供试苜蓿42个品种进行了RAPD扩增，根据遗传距离进行了聚类分析，将供试品种基本按照来源的不同分成了五类，第一类包括辛普劳和Magna601，两个都是美国品种：第二类包括WL-323ML、CW-200、CW-340、敖汉苜蓿、金字塔、菲尔兹、大叶苜蓿，主要是美国品种；第三类包括公农二号、草原一号、草原二号、苜蓿王、霍普兰德、公农一号、龙牧803、龙牧801、肇东苜蓿，主要是吉林、内蒙、黑龙江品种，其中除了霍普兰德和苜蓿王两个美国品种之外，其它品种叶色相同、大部分为叶片不柔软，9个品种中除了苜蓿王以外都是抗寒品种，说明大部分品种的生态型相同：第四类包括兼用型、农宝、CW301、胜利者、Ladak+、多叶苜蓿，主要是美国和加拿大品种；第五类WL-232HQ、WL-252HQ、CW272、诺瓦苜蓿、Magnum-Wet、CW-321、WL-525、金钥匙、得龙苜蓿、紫花苜蓿、阿尔冈金、熊一号、甘农一号、朝阳苜蓿、WL-323接种、MagnumV、WL324、CW-306,主要是美国、甘肃、宁夏品种。证明RAPD技术可作为苜蓿分类鉴定的依据。
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