摘要
目的(1)研究了蒙药“查干汤”不同制备工艺粉对小鼠脾淋巴细胞体外增殖活性及对CTX所致免疫抑制模型小鼠体内的免疫调节活性研究。(2)比较不同制备工艺“查干汤”免疫调节作用，筛选出免疫调节活性较好的“查干汤”冻干粉进行体内免疫调节活性深入研究。“查干汤”及其组方药材含解热、镇痛、抗炎、抗菌、增强免疫等活性成分，尚停留在体外分离追踪水平，只是初步阐释了该方用于蒙医热病治疗的科学性，同时免疫调节作用研究尚停留在体外水平，在整体动物水平未作深入研究。本研究通过整体动物水平，探讨“查干汤”对机体免疫功能的影响，探寻该方的免疫调节活性作用，为揭示该方治疗瘟疫热症的药效物质基础提供新的思路与方法。 方法(1)通过冷冻干燥法、喷雾干燥法、生药材直接粉碎法，将土木香、苦参、悬钩子木和山柰4味组方药材，分别通过粉碎混合后，制备成“查干汤”冻干粉、工艺粉及超微粉，并对其进行含量测定。(2)通过临床常用化疗药物，环磷酰胺(cyclopho sphamide，CTX)建立免疫抑制小鼠模型。通过测定CTX对正常小鼠非特异性免疫和特异性免疫功能的影响，判断其模型建立是否成功。在非特异性免疫功能的水平上，通过尾静脉采血的方式，监测CTX对正常小鼠外周血细胞数量的影响；通过碳粒廓清法，测定CTX对正常小鼠巨噬细胞吞噬指数的影响；通过重量法，测定CTX对正常小鼠免疫器官胸腺、脾脏重量的影响。在特异性免疫功能水平上，通过耳肿胀度法，测定CTX对正常小鼠迟发型超敏反应所致的耳肿胀度的影响。(3)通过CCK-8细胞染色法，研究不同药物浓度“查干汤”冻干粉、工艺粉及超微粉对小鼠脾淋巴细胞体外增殖免疫活性的影响。通过碳粒廓清法、重量法，研究单一给药剂量“查干汤”冻干粉、工艺粉及超微粉对免疫抑制小鼠模型的体内免疫调节活性的影响。(4)通过碳粒廓清法、重量法、CCK-8细胞染色法、耳肿胀度法，研究两种方式，预防性给予“查干汤”冻干粉和治疗性给予“查干汤”冻干粉，对CTX所致免疫抑制小鼠模型的免疫调节作用的影响。 结果(1)不同方法制备的“查干汤”，提取工艺合理可行，含量均符合药典质量标准，各主要成分含量有所差异。(2)通过对正常小鼠，通过腹腔注射给药的方式，第1-3天给予CTX(80mg/kg/d)；第4天、6，剂量减半，给予CTX(40mg/kg/d)的维持剂量及第10、8天，剂量再减半，给予CTX(20mg/kg/d)，可成功建立免疫抑制小鼠模型。(3)“查干汤”冻干粉和工艺粉，在药物高浓度200.0μg/ml和中浓度40.0μg/ml，“查干汤”工艺粉和冻干粉均能不同程度提高淋巴细胞生长率，并呈浓度依赖性。但在低浓度5.0μg/ml时均无脾淋巴细胞增殖活性；“查干汤”超微粉在各药物浓度下均无促淋巴细胞增殖作用。“查干汤”冻干粉及工艺粉均能不同程度拮抗CTX所致免疫抑制小鼠模型的免疫器官脾脏指数的降低，其中冻干粉治疗趋势更为明显；同时冻干粉及工艺粉可对抗CTX所致免疫抑制小鼠模型外周血白细胞数目的降低。但是，在通过碳粒廓清法直接反映单核巨噬细胞在机体内的相关吞噬功能实验中，未见明显的治疗作用。(4)选择“查干汤”进行不同剂量组整体动物水平的免疫调节活性研究，通过CTX建立免疫抑制小鼠模型，在免疫器官水平，“查干汤”高剂量组可对抗CTX所致免疫抑制小鼠模型的脾脏重量的降低；在免疫细胞水平，“查干汤”高剂量组可对抗CTX所致免疫抑制小鼠模型的外周血白细胞数目的降低，同时与空白组相比，“查干汤”各给药组还可协同ConA和LPS诱导CTX所致免疫抑制小鼠模型的脾脏中T、B淋巴细胞具有增殖趋势，但无统计学意义。在预防性给药治疗过程中，“查干汤”对CTX所致免疫抑制小鼠模型的WBC计数降低、免疫器官脾脏重量的降低等正向无调节作用。 结论(1)“查干汤”工艺粉和冻干粉均能不同程度体外诱导脾淋巴细胞增殖，并呈浓度依赖性，同时可拮抗CTX所致免疫抑制小鼠模型的部分免疫细胞数目降低及免疫器官重量的减少。(4)“查干汤”可在部分免疫细胞、免疫器官水平上，对CTX所致免疫抑制小鼠模型有一定的正向调节作用，但预防性给予“查干汤”并无调节作用。
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