摘要
背景：成体神经发生是通过再生治疗人类中枢神经系统(CNS)疾病的重要过程，它通过招募成体神经干细胞(NSCs)这一过程来完成。NSCs具有产生星形胶质细胞、神经元及少突胶质细胞的能力。为了弄清参与成体神经发生过程中的调控因素，对于临床治疗应用具有重要的启发作用。这里我们报道BAF45D和GFAP在成年脊髓中央管(CC)中的共表达，而且通过定量数据分析，发现了BAF45D优先表达于成体中枢神经系统中的神经元。此外，PAX6是神经外胚层分化的一项决定因素，而P19细胞在神经外胚层分化过程中，BAF45D参与PAX6的表达。总的来说，我们的研究可能为BAF45D在成体神经元区的表达和对早期神经发展的作用提供一个新的视野。 目的：主要研究方面：1)：BAF45D在成体神经源区的表达；2):BAF45D和NEUN、BAF45D和GFAP、BAF45D和BETA-Ⅲ-tubulin在成鼠脊髓中的共表达；3):探讨BAF45D蛋白，在维甲酸(RA)体外诱导P19胚胎癌细胞向神经元样细胞分化过程中的作用及其变化； 方法：1):选用C57/BL6成年小鼠(10-12周，体重25-30g)制备脊髓横断面切片，并采用免疫组织化学技术(IHC)和免疫组织荧光技术(IF)检测BAF45D、NEUN、GFAP、BETA-Ⅲ-tubulin蛋白在脊髓中的表达；2):选用维甲酸(RA1μM)诱导鼠P19细胞向神经方向的分化，并且利用免疫印迹法(IB)技术检测BAF45D、OCT4、NESTIN和PAX6的表达情况；3):制备成鼠脊髓和海马组织的蛋白悬液，并运用免疫印迹法(IB)检测BAF45D、NEUN、GFAP、GAPDH的表达； 结果：1):BAF45D在成鼠脊髓的非室管膜细胞核中，和中央管室管膜细胞核中均可以阳性表达；2):GFAP在细胞突起中的强表达，且BAF45D和GFAP可共表达在同一细胞中；3):BAF45D可在NEUN、BBETA-Ⅲ-tubulin标志的神经元中的表达，且BETA-Ⅲ-tubulin和BAF45D共表达在细胞质中；4):GFAP同时在脊髓灰质和白质中表达，而BAF45D和BETA-Ⅲ-tubulin主要表达在灰质中；5):在RA诱导P19细胞的第5天时，光镜下观察细胞的形态，大部分都伸出突起样结构。而无RA诱导的P19细胞，维持原先细胞形态；6):在RA的诱导过程中，神经元特异性标志物Nestin随着诱导的时间延长，表达量也逐渐增加，说明了RA可以有效刺激P19细胞向神经细胞方向的分化；7):在RA诱导P19神经分化的过程中，Pax6在早期呈现出逐渐增加的趋势，在第四天达到高峰状态，随后其表达量又逐渐降低；OCT4的表达水平逐渐降低，可呈时间依赖性；BAF45D的表达量在逐渐增加，可呈时间依赖性；8):GFAP在脊髓中的表达明显多于海马；BAF45D和NEUN在海马中的表达稍多于脊髓； 结论：1):BAF45D在成年鼠脊髓的中央管室管膜细胞中表达；2):BAF45D优先表达在成年鼠脊髓中的成熟神经元；3):维甲酸(RA)能成功的诱导P19细胞向神经方向的分化，而且分化过程中PAX6的产生与BAF45D是有一定联系的。
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