摘要
目的：本次实验检测乳腺癌组织和对应癌旁组织中LncSNHG1(简称SNHG1)的表达变化，并通过shRNA技术下调乳腺癌细胞中SNHG1表达水平，明确SNHG1在乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移中的作用和靶向调控机制，此研究不仅有利于以后明确SNHG1在肿瘤中的作用，更能够为未来研究乳腺癌的分子发生机制寻找新的靶点。 方法： 1.收集乳腺癌组织及对应的癌旁组织，以qRT-PCR方法测定SNHG1在乳腺癌组织中的表达变化。 2.细胞培养用含10%胎牛血清、链霉素(100U/mL )、青霉素(100U/mL)的细胞培养液培养乳腺癌细胞，细胞培养的参数为饱和湿度、37℃、5%CO2浓度。所有实验细胞均使用处于对数生长期、状态良好的细胞。细胞传代用含有0.25%的胰蛋白酶消化，细胞消化温度为37℃，消化时间约1min，在显微镜下观察细胞单个存在时，1000g离心10min，把上清溶液吸弃，添加细胞培养液继续培养。 3.在乳腺癌细胞中转染SNHG1shRNA(sh-SNHG1)和shRNAcontrol(sh-NC)，以qRT-PCR方法检测下调效果，MTT方法测定细胞增殖变化，流式细胞术测定细胞凋亡变化，Transwell小室测定细胞迁移和侵袭数目变化，Westernblot测定细胞中CleavedCaspase-3和MMP-2蛋白表达变化。 4.以qRT-PCR方法测定miR-101在乳腺癌组织和对应癌旁组织中的表达变化，分析乳腺癌组织中miR-101和SNHG1表达水平的相关性。 5.利用生物信息学软件预测分析SNHG1和miR-101的靶向调控关系，根据双荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。 6.在乳腺癌细胞中同时共转染SNHG1shRNA和miR-101inhibitors(sh-SNHG1＋anti-miR-101)、SNHG1shRNA和inhibitorscontrol(sh-SNHG1＋anti-NC)，MTT方法测定细胞增殖变化，流式细胞术测定细胞凋亡变化，Transwell小室测定细胞迁移和侵袭数目变化，Westernblot测定细胞中CleavedCaspase-3和MMP-2蛋白表达变化。 7.在乳腺癌细胞中转染miR-101mimics(miR-101)和mimicscontrol(miR-NC)，以qRT-PCR方法检测上调效果，MTT方法测定细胞增殖变化，流式细胞术测定细胞凋亡变化，Transwell小室测定细胞迁移和侵袭数目变化，Westernblot测定细胞中CleavedCaspase-3和MMP-2蛋白表达变化。 结果： 1.SNHG1在乳腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05)。 2.与sh-NC比较，sh-SNHG1细胞中SNHG1水平明显降低，细胞增殖能力降低，细胞凋亡率升高，细胞侵袭和迁移数目下降，细胞内的CleavedCaspase-3蛋白水平表达升高，MMP-2蛋白表达水平减少(P＜0.05)。 3.miR-101在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P＜0.05)。并且乳腺癌组织中miR-101和SNHG1表达水平呈负相关。 4.生物信息学软件预测SNHG1与miR-101具有靶向结合位点，共转染SNHG1-WT和miR-101mimincs后的乳腺癌细胞荧光素酶活性降低，并且sh-SNHG1细胞中miR-101的表达水平升高。 5.与sh-SNHG1＋anti-NC比较，sh-SNHG1＋anti-miR-101细胞增殖能力升高，细胞凋亡率降低，细胞侵袭和迁移数目增多，细胞中CleavedCaspase-3蛋白水平降低，MMP-2蛋白水平升高。 6.与miR-NC比较，miR-101细胞中miR-101表达水平升高，细胞增殖能力降低，细胞凋亡率升高，细胞侵袭和迁移数目下降，细胞内的CleavedCaspase-3蛋白水平表达升高，MMP-2蛋白表达水平减少(P＜0.05)。 结论： 1.SNHG1在乳腺癌组织中表达上调，下调SNHG1能够抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移并诱导细胞凋亡。 2.miR-101在乳腺癌组织中表达下调，上调miR-101抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移并诱导细胞凋亡。 3.SNHG1作用机制与靶向调控miR-101有关。
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