摘要
猫须草，为唇形科肾茶属植物猫须草Orthosiphon stamineus Benth.(OS)的干燥全草，主要分布在我国广西、云南、福建等地以及马来西亚、印度尼西亚等东南亚国家。猫须草具有清热利水、排石通淋之功效，药理研究发现猫须草具有抗炎、利尿、降压、降糖、抗氧化、保肝护肝和抗增殖等作用。猫须草化学成分复杂，现已报道的化学成分主要分为黄酮类、酚类、木脂素类、萜类及一些其它类化合物。 本文以猫须草为研究对象，基于超高效液相色谱仪、四极杆飞行时间质谱仪和三重四极杆质谱仪等技术，对猫须草中的成分进行了定性及定量研究，同时研究了猫须草中9种成分在大鼠体内的代谢动力学和排泄动力学特征，为猫须草的临床应用提供了一定的科学依据。论文内容共分八章，其中第三至七章为研究部分，具体研究内容如下： 第一章主要围绕本课题的研究背景、研究目的与意义进行展开，对本课题的研究方案、预期目标和论文的基本框架进行了简单的介绍。 第二章对猫须草的化学成分、药理作用以及猫须草的分析方法等方面进行了全面的综述。 第三章建立了一种快速、准确的UPLC-PDA分析方法。该方法使用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱，进行梯度洗脱，并对其做了方法学考察。研究结果表明所建立的UPLC-PDA法具有良好的精密度（RSD≤3.74%）、重现性（RSD≤6.35%）和稳定性（RSD≤5.70%）。通过指纹图谱相似度评价软件分析，共匹配出32个共有峰，结合主成分分析和系统聚类分析可将8批不同来源的猫须草分为两大类。该方法简便、快速、灵敏度高，可为猫须草的质量控制提供新的方法。 第四章建立了一种快速、可靠的UPLC-ESI-QTOF-MS技术鉴定猫须草50%甲醇提取物的分析方法。首先对猫须草50%甲醇提取物进行信息采集，其次采用Compass DataAnalysis数据处理软件中“Smart Formula”等分析功能，鉴定和标识了猫须草中的主要化学成分。同时，实验中还通过电喷雾离子源正、负离子一级质谱全扫描、自动二级（Auto MS/MS）扫描等扫描方式，研究了猫须草化学成分中部分对照品的质谱裂解路径、总结各自规律并应用于猫须草中其它化学成分的结构鉴定。猫须草50%甲醇提取物中共检测出61个化合物，其中52个化合物被明确鉴定和初步标识，包括26个酚酸类化合物，11个黄酮类化合物，6个二萜类化合物，4个脂肪酸类化合物以及5个丹参酮类化合物。 第五章建立了一种同时测定猫须草50%甲醇提取物中DSS、CAA、RA、SIN和EUP含量的UPLC-ESI-MS/MS方法。该方法使用Waters BEH Shield RP C18色谱柱，进行梯度洗脱，在电喷雾电离正、负离子模式下，采用多反应监测模式（MRM）对5种化合物进行定量分析。5种化合物的定量离子对分别为m/z197.02→m/z134.98(DSS)、m/z179.01→m/z106.93(CAA)、m/z359.05→m/z160.98(RA)、m/z373.03→m/z343.09(SIN)和m/z345.06→m/z312.06(EUP)。结果表明各组分在10min内均能达到基线分离，在考察的浓度范围内线性关系良好（R2≥0.9930），最低定量限（LLOQ）均低于7.6ng/mL，精密度的相对标准偏差RSD在1.87%～10.36%之间，加样回收率在105.30%～110.53%之间。该方法结果准确、简便快速、重现性好，并成功应用于3批猫须草样品中这5种化合物的含量测定。 第六章建立了一种同时测定大鼠血浆中PCA、DSS、CAA、RA、CA、SalA、Sal B、SIN和EUP含量的UPLC-ESI-MS/MS分析方法。该方法使用Waters BEH ShieldRPC18色谱柱，进行梯度洗脱，在电喷雾电离正、负离子模式下，采用多反应监测模式（MRM）对9种化合物进行定量分析。9种化合物和内标物的定量离子对分别为m/z153.1223→m/z91.0576(PCA)、m/z197.1486→m/z135.1198(DSS)、m/z179.1380→m/z107.0708(CAA)、m/z359.1803→m/z161.1187(RA)、m/z373.2166→m/z343.2086(SIN)、m/z345.2492→m/z312.1695(EUP)、m/z473.1117→m/z311.1818(CA)、m/z493.1532→m/z295.1926(SalA)、m/z717.1853→m/z519.2154(Sal B)和m/z321.1082→m/z152.0850(CHL)。结果表明各组分在10min内均能达到基线分离，在考察的浓度范围内线性关系良好（r≥0.9915），最低定量限（LLOQ）均低于8.7ng/mL，日内、日间精密度的相对标准偏差RSD小于13.54%，相对误差RE为-13.60%～14.80%，平均提取回收率为105.30%～110.53%之间。对该方法进行了系统的方法学验证后成功应用于大鼠灌胃给予猫须草水提物后血浆中9种成分的药代动力学研究，并建立各自的药-时曲线，阐明药效学参数。该方法简单、快速、专属性好、灵敏度高，对猫须草的大鼠体内定量分析具有重要的意义，有益于猫须草的临床应用。 第七章建立了一种同时测定大鼠尿液和粪便中9种成分（PCA、DSS、CAA、RA、CA、Sal A、Sal B、SIN和EUP）含量的UPLC-ESI-MS/MS分析方法。该方法使用Waters BEH Shield RP C18色谱柱，在电喷雾电离正、负离子模式下，采用多反应监测模式（MRM）进行定量分析。结果表明各组分在10min内均能达到基线分离，在考察的浓度范围内线性关系良好（尿液中，r≥0.9802；粪便中r≥0.9714），日内、日间精密度的相对标准偏差RSD均小于14.76%，相对误差RE均在±15%以内，尿液样品中的提取回收率为85.49～122.91%，基质效应为62.38%～117.22%，粪便样品中的提取回收率为85.24%～110.38%，基质效应为63.05%～132.79%；尿液和粪便样品在考察条件下，稳定性良好。将该方法成功应用于大鼠灌胃给予猫须草水提物后9种成分的尿液和粪便排泄动力学研究,可以满足猫须草在尿液和粪便中的排泄研究，为中药猫须草的进一步的临床应用提供了重要的参考依据。 本文系统地研究了中药猫须草的质量评价以及在大鼠体内的药代动力学特征，可为猫须草的临床应用提供合理地指导，药代动力学参数可以为毒性实验和毒理效应的分析提供科学依据，对其药理学研究及在中医临床的发展及应用有着重要的意义。
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