摘要
目的：本研究观察三维条件下富含滑膜间充质干细胞/软骨细胞的脱去细胞含有细胞外基质的支架复合物成软骨能力。 方法：(1)兔膝关节滑膜组织及软骨组织、腹股沟部脂肪组织分离培养，体外扩增。(2)取生长良好的第1代脂肪间充质干细胞用慢病毒介导TGF-β3转染，后接种于3D打印的聚己内酯/羟基磷灰石(PCL-HA)复合支架材料。(3)将滑膜间充质干细胞/软骨细胞接种于构建好的富细胞外基质(ECM)的支架材料体外培养构建关节软骨。(4)采用RT-PCR检测RNA水平上COL-Ⅰ、COL-Ⅱ、SOX-9、Aggrecan基因表达的影响。(5)采用免疫印迹法检测软骨特异性蛋白的表达。 结果：(1)将接种转染后的脂肪间充质干细胞的支架复合物培养14d后，激光共聚焦扫描可见细胞在支架表面分布均匀，逐层扫描后细胞逐渐减少。(2)将滑膜间充质干细胞/软骨细胞混合培养于ECM-PCL-HA支架材料后，体外培养1周、2周及4周后，经实时荧光定量PCR，滑膜间充质干细胞/软骨细胞接种于ECM-PCL-HA组，单纯滑膜间充质干细胞或单纯软骨细胞接种于ECM-PCL-HA组，从时间上（1周，2周及4周）可见Aggrecan、COL-Ⅱ、SOX-9及COL-Ⅰ均呈上升趋势，并且有明显差异(P＜0.05)，实验组与两组对照组相互比较后可见，Aggrecan、COL-Ⅱ及SOX-9的mRNA的表达量高明显增加(P＜0.05)；但两组在COL-Ⅰ的mRNA的基因表达量上未见明显差异(P＞0.05)；(3)滑膜间充质干细胞/软骨细胞混合培养于ECM-PCL-HA支架材料在培养4周后，COL-Ⅱ在蛋白水平上均高于滑膜间充质干细胞培养于ECM-PCL-HA支架材料组(P＜0.05)及软骨细胞培养于ECM-PCL-HA支架材料组(P＜0.01)，差异有统计学意义。 结论：两组细胞混合培养于富细胞外基质的支架材料中，有软骨相关基因或蛋白的表达，并且表达量明显高于单纯滑膜间充质干细胞或单纯软骨细胞接种于ECM-PCL-HA支架材料。
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