摘要
本文从以下两部分进行阐述: 第一部分:FMO3在肝再生和肝癌中的作用 背景:具有代谢和解毒功能的肝脏，在被部分切除或受到毒性物质损伤后，残余肝脏会在各种因子的作用下进入增殖状态启动再生，当损伤因素持续作用时就会发展成肝纤维化，若进一步发展则可能发生癌变，肝癌是恶性程度最高的肿瘤之一，在肝癌发生发展的过程中，肝细胞本身的代谢和解毒功能则会改变。 FMO3是在成人肝脏中起主要作用的黄素单加氧酶。肠道微生物可以将机体摄入的含有胆碱类物质转变为三甲胺(TMA)，三甲胺在肝脏经过FMO3氧化生成氧化三甲胺(TMAO)。 目的:实验室通过再生标本基因芯片分析发现FMO3基因表达在再生过程中明显下降，而在肝癌中也是低表达，为此对于FMO3及其代谢产物在肝再生和肝癌中的作用和临床意义进行研究。 方法:用qPCR、Western Blot、免疫组化方法研究FMO3在肝再生标本和肝癌的表达情况。给小鼠喂食TMAO，研究TMAO对部分肝切除术后再生的影响。研究FMO3的表达与患者临床病理资料，分析FMO3与患者临床病理特征及预后的相关性。通过病毒转染构建FMO3过表达的稳定转染的细胞株。通过CCK-8、克隆形成、Transwell细胞迁移以及裸鼠皮下成瘤模型研究FMO3对肝癌细胞的增殖、迁移的影响。用qPCR、Western Blot方法研究TMAO影响肝再生和FMO3抑制肝癌细胞增殖的信号机制。 结果:发现FMO3在肝再生和肝癌中表达明显降低，TMAO能够明显抑制部分肝切除术后肝脏的再生，对106例肝癌组织进行免疫组化检测，通过Kaplan-Meier生存分析结果发现，FMO3低表达的肝癌患者有着较差的总生存期和无瘤生存期。COX多因素分析发现，FMO3为肝癌患者总生存期和无瘤生存期的独立危险因素。通过对FMO3蛋白的过表达，发现当过表达FMO3后，PI3K/AKT/mTOR通路受到抑制，肝癌细胞的增殖能力减弱。 结论:首次发现FMO3在肝再生、肝损伤、肝纤维化中低表达，FMO3的代谢产物TMAO可以通过多种途径抑制部分肝切除术后肝脏的再生，且FMO3的低表达与肝癌患者的术后预后较差有密切关系，FMO3可以作为肝癌患者肝切除术后的一个预测预后的指标。FMO3通过负向调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制肝癌细胞的增殖。 第二部分:CSN6促进肝细胞性肝癌的上皮-间质转化 目的:CSN6是组成型光形态发生因子9信号体(COP9)的一个关键亚基单位，在之前的文献报道中，CSN6在各种不同的癌症中表达量均有所增高;然而，其在肝细胞性肝癌中的作用目前仍不清楚。本研究旨在探讨CSN6在肝癌中的表达及其在肝癌发生发展中发挥的作用。 方法:采用qPCR、Western blot和免疫组化方法检测CSN6的表达。采用Kaplan-Meier生存分析以及通过单变量和多变量COX分析，探讨CSN6在肝癌患者中表达的临床和预后意义。在肝癌细胞中分别过表达和敲减CSN6，通过测定CCK-8、小室迁移和侵袭实验探究了CSN6对肝癌细胞增殖和迁移的生物学影响。此外，还检测了CSN6与上皮-间质转化(EMT)的关系。 结果:在肝癌组织中CSN6的表达量增高，并且CSN6的高表达程度与肝癌患者的不良预后有关。CSN6的过表达促进了肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而当CSN6敲减时，这些过程受到抑制。此外，还发现CSN6通过抑制E-钙粘蛋白来促进EMT，E-钙粘蛋白的降低是通过激活肝癌细胞的MEK/ERK通路而介导的。 结论:CSN6上调可能是EMT激活并导致肝癌转移和预后不良的原因之一。CSN6可作为肝癌预后的独立预测因子。
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