摘要
鸭传染性浆膜炎和鸭大肠杆菌病是鸭的两种最主要细菌性疫病，两者在临床上发病年龄、症状和剖检变化等及其相似，并常以混合感染的形式出现，发病率和死亡率高。目前发病采取主要药物治疗措施，但因细菌耐药性问题导致治疗效果不佳，而且极易造成药物残留的食品安全风险，因此，采用疫苗防控是必然选择。本实验是在完成“鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗(CZ12株+SH株)”实验室研究的基础上，为优化该疫苗生产工艺开展的研究工作。 本实验分四个步骤，分别从培养基筛选、发酵工艺研究、浓缩工艺研究和灭活工艺研究方面进行。 1、培养基筛选研究:采用改良马丁汤培养基、TB、酵母肉汤和P-L肉汤四种培养基，对CZ12株和SH株进行增菌培养同步对比试验，分别测定培养后12h、14h、16h、18h、20h、22h和24h培养液中的活菌数。目的是为筛选一种制备简便、成本低廉、增菌效果好的培养基，为鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗(CZ12株+SH株)工业化大生产做准备。 结果表明，改良马丁汤培养基和TB的增菌效果均高于酵母肉汤和P-L肉汤培养基，且二者没有明显差异。经改良马丁汤培养基培养，CZ12株在20～24h细菌增殖到最高水平，活菌数可达到5.2×109～8.1×109CFU/ml，SH株在培养16～20h细菌增殖到最高水平，活菌数可达到9.5×1010～1.4×1010CFU/ml。因改良马丁汤培养基成本较低、配制简便，确定为该疫苗的生产用培养基。 2、发酵培养工艺研究:在5L发酵罐上分别研究了鸭疫里氏杆菌CZ12株和大肠杆菌SH株发酵培养工艺。确定了菌种的接种量为1％，搅拌通气培养，培养基pH值7.2，鸭疫里氏杆菌CZ12株活菌数可达6.0～8.0×109CFU/ml，大肠杆菌SH活菌数可达1.2～1.45×1010CFU/ml，确定了两种菌株培养工艺。 3、浓缩工艺研究:采用超滤浓缩方法和连续离心沉降法将鸭疫里氏杆菌CZ12株和大肠杆菌SH株培养物浓缩。对采用不同浓缩工艺制备的鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗的物理性状、安全性和免疫效力等方面进行比较，进一步衡量浓缩工艺的可行性。经试验表明，两种方法均可作为规模化生产的浓缩工艺技术。 4、灭活工艺研究:将CZ12株和SH株抗原原液、浓缩液，用不同甲醛溶液浓度0.1％、0.3％、0.5％，置37℃下灭活，不同时间分别取样，进行灭活检验。试验结果表明:鸭疫里氏杆菌CZ12株抗原浓缩液用浓度为0.3％的甲醛溶液，37℃作用16h方可灭活完全:大肠杆菌SH株抗原浓缩液用浓度为0.5％的甲醛溶液，37℃作用至16h方可灭活完全。所以，为了保证抗原能灭活彻底，将鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗(CZ12株+SH株)灭活工艺设定为:鸭疫里氏杆菌CZ12株按菌液总量的0.3％加入甲醛溶液，大肠杆菌SH株按菌液总量的0.5％加入甲醛溶液，置37℃灭活24h，每隔2h充分震摇或搅拌一次。
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