摘要
水产养殖上，水环境的保护和水产品质量安全广受关注，传统依赖化肥、农药、杀虫剂和抗生素等养殖方式逐渐受到质疑和摒弃。为了寻求一种可持续生态养殖方式，本研究以鱼腥草为研究手段，通过在水面栽培形成鱼腥草生物浮床和干粉饲料添剂养殖罗非鱼，研究不同水面种植面积和饲料添加比例对罗非鱼生长、代谢和免疫基因表达的影响，寻找最佳鱼腥草种植面积和饲料添加比例，为罗非鱼绿色养殖提供参考。 1、开展鱼腥草4个不同种植面积(0％、5％、10％、15％)对罗非鱼血清生理生化指标、头肾组织免疫基因表达和罗非鱼人工感染无乳链球菌后抗病能力几个方面内容研究，分别在鱼腥草种植45d、90d和攻毒后72h三个时间点进行罗非鱼血液采集。头肾组织收集工作。 (1)罗非鱼血清中生理生化指标分析结果显示:水面种植鱼腥草45d后，15％面积组血清中ALT(谷丙转氨酶)、Glu(葡萄糖)含量显著高于对照组(P＜0.05)，AST(谷草转氨酶)、AKP(碱性磷酸酶)、ALB(白蛋白)、TP(总蛋白)含量在实验组和对照组之间无显著差异(P＞0.05)，10％面积组血清中SOD含量显著低于其他组(P＜0.05);水面种植鱼腥草90d后，实验组与对照组血清中ALT、TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)含量无显著差异(P＞0.05)，对照组血清中AST、AKP、ALB、Glu、SOD、TP含量显著低于各实验组(P＜0.05);罗非鱼人工感染无乳链球菌72h后。5％面积组和10％面积组ALT、AST含量显著低于对照组(P＜0.05)，且攻毒前后两组呈逐渐下降趋势，实验组血清中AKP含量攻毒前后呈逐渐上升状态，且在这一时间段中5％面积组和10％面积组显著高于对照组(P＜0.05)，10％面积组血清中ALB、Glu、SOD、TC含量显著高于对照组(P＜0.05)，10％面积组血清中TG含量显著低于其他水平，攻毒前后出现逐渐下降趋势。 (2)罗非鱼头肾组织免疫功能基因表达结果显示:攻毒前实验组与对照组C-LZM无显著差异(P＞0.05)，攻毒后比攻毒前基因表达量均有所上调，10％面积组显著高于其他组:头肾组织中脚7D攻毒前45d和90d，10％面积组均显著高于对照组(P＜0.05)，攻毒后，10％面积组和15％面积组仍能保持较高的表达水平;在整个实验周期，10％面积组头肾组织中IFN-γ表达量组始终显著高于对照组(P＜0.05)，攻毒后72h，10％面积组基因表达量是0％面积组的2.9倍;1L-1β在实验周期的三个时间段，实验组与对照组之间无显著差异(P＞0.05)，但各组在攻毒后均出现基因上调趋势;攻毒后72h鱼体头肾中TNF-α表达量10％面积组是对照组的2.28倍，且10％面积组和15％面积组与其他两组之间存在差异显著性(P＜0.05)。 (3)罗非鱼高浓度链球菌感染实验结果显示:4×108cfu/mL浓度的无乳链球菌对罗非鱼进行攻毒，0.2mL/尾，分别记录感染后12h、24h、36h、48h和72h死亡鱼数。结果发现攻毒后10％组死亡率始终保持最低水平。其次是5％面积组和15％面积组，对照组0％面积组一直处于较高死亡率。随着感染时间的推迟。实验组和对照组出现逐渐上升趋势，在感染后72h时，0％面积组死亡高达88.33％，5％组、10％组和15％组依次为75％、78.33％和58.33％。 2、开展不同比例鱼腥草饲料添加对罗非鱼免疫水平调控的研究:分别配制0、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％质量比的鱼腥草干粉添加饲料，在循环水养殖系统中投喂60d。从生长指标上分析，通过投喂适量的鱼腥草比例饲料的实验组能提高鱼体肥满度指标，同时降低脏体比、肝体比，且在添加2.0％量时，末体重和肥满度显著高于对照组(P＜0.05)。在血清生理生化方面，攻毒后3.0％组溶菌酶含量显著高于对照组溶菌酶含量(P＜0.05):在饲养60d时，2.0％组罗非鱼血清中SOD含量显著高于其他组(P＜0.05):攻毒后72h，各实验组血清中ALT含量显著低于对照组(P＜0.05)，且2.0％含量最低。攻毒72h后，添加2.0％组血清中AKP含量显著高于其他组(P＜0.05)。在免疫基因表达方面:饲养罗非鱼60d，C-LZM在头肾中表达量2.0％组显著高于对照组(P＜0.05)，人工感染无乳链球菌72h后，4％组显著高于对照组(P＜0.05):攻毒后72h，添加鱼腥草中草药粉末的各个实验组组HSP70基因表达量均高于对照组，且1.0％组与对照组之间存在显著差异(P＜0.05):人工感染链球菌72h后，2.0％组IFN-γ基因表达显著高于对照组(P＜0.05):攻毒前添加3.0％组和4.0％组IL-1β基因在鱼头肾中表达含量显著高于对照组(P＜0.05)，攻毒后72h，且1.0％组和2.0％组显著高于对照组(P＜0.05);养殖60d后，3.0％组和4.0％组TNF-α表达量显著高于对照组(P＜0.05)，人工感染无乳链球菌72h后，其中4.0％组表达量最高，与对照组之间存在显著差异(P＜0.05)，其表达量是对照组的3.5倍。
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