摘要
背景: 抑郁症是目前严重困扰人类的一大疾病，大多数抗抑郁药疗效较差，副作用大，寻求安全有效的替代疗法治疗抑郁症是非常必要的。十三鬼穴是历代针灸治疗神志病的经验效穴，现代研究也证实十三鬼穴对抑郁症等精神类疾病有独特疗效，但其作用机制未完全阐明。 目的: 观察十三鬼穴之“大陵”、“上星”对慢性轻度不可预测性应激(CUMS)抑郁模型大鼠行为学、五羟色胺神经递质(5-HT)、外侧缰核β-CaMKⅡ及一氧化氮和环磷酸鸟苷(NO-cGMP)信号通路影响，探讨针灸“大陵”、“上星”的抗抑郁机制。 1.采用糖水偏好实验(SPT)、旷场实验(OFT)及高架十字迷宫(EPM)等行为学方法，观察针灸“大陵”、“上星”对慢性轻度不可预测性应激抑郁模型大鼠抑郁样行为的逆转作用。 2.检测实验大鼠海马、前额皮质和血清样本中五羟色胺神经递质含量，探讨针灸“大陵”、“上星”对慢性轻度不可预测性应激抑郁模型大鼠中枢神经系统5-HT影响。 3.检测实验大鼠外侧缰核组织样本中β-CaMKⅡ蛋白与mRNA水平表达情况，观察针灸“大陵”、“上星”对CUMS抑郁大鼠外侧缰核β-CaMKⅡ的影响。 4.检测实验大鼠海马和血浆样本中NO和cGMP含量变化以及海马组织中iNOS、nNOS、NR1、NR2A、NR2B的mRNA表达情况，观察针灸“大陵”、“上星”对CUMS抑郁大鼠NO-cGMP信号通路的影响。 方法: 60只SD大鼠随机分成6组，分别是正常对照组、模型组、针刺穴位组、针刺非穴组、艾灸穴位组、艾灸非穴组，每组10只。采用慢性轻度不可预测性应激CUMS法对大鼠进行抑郁造模共42天，自造模第4周开始采用针刺与艾灸“大陵”、“上星”穴进行干预治疗21天。实验期间定期进行体重监测、糖水偏好实验、旷场实验及高架十字迷宫测试;实验结束取材大鼠脑组织及血液样品进行检测:采用ELISA方法分别检测大鼠海马、前额皮质和血清样本中5-HT的含量变化，及大鼠海马和血浆样本中NO和cGMP含量变化;RT-PCR分析大鼠海马组织中iNOS、nNOS、NR1、NR2A、NR2B的mRNA表达水平变化;Western Blot、qPCR分别检测外侧缰核组织中β-CaMKⅡ蛋白与mRNA水平表达变化。 结果: 1.与正常对照组相比，模型组大鼠体重增长、糖水消耗、旷场实验及高架十字迷宫分数均显著降低（P＜0.05）;与模型组相比，针刺与艾灸穴组均可显著逆转抑郁大鼠体重和行为学的改变（P＜0.05）。 2.与正常对照组相比，模型组大鼠的海马、前额皮质、血清中5-HT含量显著下降（P＜0.01）;与模型组相比，针灸穴位和艾灸穴位组5-HT含量升高（P＜0.05）。 3.与正常对照组相比，模型大鼠外侧缰核中β-CaMKⅡ蛋白与mRNA表达水平明显上升（P＜0.05）;与模型组相比，针灸穴位组和艾灸穴位组β-CaMKⅡ蛋白与mRNA表达水平显著下调（P＜0.05）。 4.与正常对照组相比，模型大鼠海马、血浆样本中NO和cGMP含量明显升高（P＜0.01），并且海马组织中NO-cGMP通路内NR1、nNOS、iNOS、NR2A、NR2BmRNA表达水平均升高（P＜0.05）;与模型组相比，针灸穴位组和艾灸穴位组大鼠海马、血浆样本中NO和cGMP含量下降（P＜0.05），针刺穴位大鼠海马中NR1、nNOS、iNOS、NR2A、NR2B的mRNA表达水平显著下调（P＜0.05），艾灸穴位组大鼠海马中NR1、iNOS、NR2A、NR2B的mRNA表达水平显著下调（P＜0.05）。 结论: 针灸十三鬼穴之“大陵”、“上星”能够改善慢性不可预测应激模型大鼠的整体状态，对CUMS大鼠体重增长趋势及抑郁样行为学的改变均有逆转作用。 针灸十三鬼穴之“大陵”、“上星”穴的抗抑郁机理可能是:通过提高实验模型大鼠海马、前额皮质和血清样本中5-羟色胺神经递质含量;下调外侧缰核中β-CaMKⅡ蛋白及其mRNA的过度表达;下调海马、血浆样本中NO、cGMP含量和海马组织中NR1、nNOS、iNOS、NR2A、NR2B的mRNA表达水平，维持NO-cGMP信号通路的平衡，从而改善实验大鼠抑郁样行为。
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