摘要
MYB转录因子存在于所有真核生物中，其家族成员数量庞大、功能多样。MYB类转录因子广泛调控类黄酮合成代谢，在植物果实品质调控及抗病性中发挥作用。甜瓜（Cucumis melo L.）品种为河套蜜瓜是内蒙古西部地区重要的经济作物，本论文选取在甜瓜果实成熟期高表达的CmMYBL基因转化甜瓜，在转基因果实中类黄酮含量发生显著变化，说明CmMYBL基因对甜瓜类黄酮的合成具有促进作用。主要研究结果如下： （1）根据转录组测序结果选取果实成熟期高表达的两个CmMYBL基因进行实时定量PCR检测，检测所得结果与转录组测序数据基本吻合。克隆得到CmMYBL-1和CmMYBL-2两个基因的cDNA序列，长度分别为564bp和714bp。运用生物信息学对CmMYBL-1、CmMYBL-2蛋白的理化性质、信号肽、磷酸化位点、跨膜结构域、二级结构等作出预测，结果显示，CmMYBL-1、CmMYBL-2均属于不稳定的酸性亲水蛋白，两个蛋白均无信号肽，不属于分泌型蛋白。 （2）检测了CmMYBL-1、CmMYBL-2两个基因在甜瓜各个组织、果实各个发育阶段的表达特性。两基因均在果实中的表达量最高，花和根中表达量次之，茎中表达量最低。果实中随着授粉后天数增加，其表达量逐渐增高，在成熟时达到最大。 （3）成功构建了CmMYBL-1、CmMYBL-2基因的超表达载体CmMYBL-1Oe、CmMYBL-2Oe以及RNAi载体CmMYBL-1Ri、CmMYBL-2Ri并使用花粉管通道法转化了甜瓜。 （4）对CmMYBL-1和CmMYBL-2的T1代植株叶片进行PCR检测，转化率在6.7%和37.5%之间。 （5）对CmMYBL-1T2代超表达及RNAi转化果实中目的基因的表达量进行了检测，结果显示超表达果实中的表达量高于对照组，RNAi转化果实中的表达量低于对照组。 （6）对T2代转基因甜瓜果实中类黄酮合成通路中相关基因进行表达量分析，结果显示，超表达果实中CmCHS、CmCHI和CmF3H的表达量显著高于野生型果实，而RNAi果实中CmCHS和CmCHI的表达量显著低于野生型果实，CmF3H的表达量略低于野生型果实。 （7）提取T2代转基因果实中类黄酮，对其含量进行分析测定，结果显示，超表达CmMYBL-1基因的甜瓜果实中类黄酮含量显著增加，而RNAi果实的类黄酮含量相对较低。 本研究初步鉴定出CmMYBL-1基因对甜瓜类黄酮的合成具有促进作用，为研究甜瓜类黄酮代谢调控奠定了理论基础，也为甜瓜果实品质提高的研究提供候选基因。
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