摘要
肺癌(lung cancer)，原发性支气管肺癌(Primary bronchogenic c arcinoma)的简称，是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，尽管肺癌的诊断技术和治疗方法不断改进，由于肺癌起病隐匿，其早期诊断率只有15％～20％。但这部分患者5年生存率却可达到60％～90％。因此，早期诊断、早期治疗是治疗肺癌的首选策略，积极寻找肺癌早期诊断的特异性标记物是提高肺癌生存率的一个简单有效方法，进而探索合理的治疗途径。噬菌体展示肽库技术，通过感染宿主菌并扩增与其低表达量的特异性结合的噬菌体克隆，将大量的随机噬菌体多肽与其DNA基因编码序列间建立起直接的联系，通过淘选定性测序，快速鉴定出各靶分子的多肽配体，具有高效、简便、大通量筛选的优点，已成为研究蛋白质分子之间相互作用的有效工具，广泛应用于肿瘤标记物、抗肿瘤药物等的筛选和研发。 目的:运用噬菌体随机12肽库筛选肺癌患者的血清，鉴定出其特异性表达的肿瘤抗原，期望为肺癌的诊断、预后提供新的肿瘤标记物。为进一步研究肺癌的诊治奠定基础。 方法：通过噬菌体随机十二肽库筛选出能与肺癌血清相关抗原特异性结合的短肽。1.分别用96孔酶标板将正常人血清和肺癌患者混合血清包被，运用减性筛选的方法，先将随机12肽库的噬菌体与正常血清吸附，未与其结合的噬菌体再与肺癌血清吸附，洗脱下最终筛选出与肺癌血清特异性结合的噬菌体，利用培养的ER2738扩增，重复此步骤筛选三次，获得最具有特异性的富集克隆噬菌体。2.挑取纯化培养富集克隆的单个噬菌斑，用ELISA方法检测每一个噬菌体与筛选时的血清的结合力，选择稳定和差异性明显的几株噬菌体扩大血清样本量再鉴定，最终得到特异性较高的两株噬菌体克隆。3.纯化并提取其噬菌体DNA，通过引物-96gⅢ测序，根据短肽插入位点和氨基酸遗传密码表得到插入短肽序列，并分析其诊断价值。 结果：经过三轮筛选，噬菌体得率提高约1000倍，挑取单个噬菌体反复且扩大样本量鉴定，及对比大肠癌、胃癌鉴定后得到两株与肺癌特异性结合较好的短肽，测序后分别为6号(QVSAEHKVQGFW)、24号(KTLTFNPKLITT)。6号的敏感性特异性分别为：93.1％、94.4％;24号的敏感性特异性分别为：98.6％、69.4％。两者敏感性特异性比较，差异无统计学意义。经生物信息学分析均末发现与此两株短肽完全一致的同源蛋白结构。 结论：本实验通过噬菌体随机十二肽库筛选出能与肺癌血清相关抗原特异性结合的短肽;为进一步阐述肺癌发生机制，对肺癌早期诊断、联合检测、免疫治疗及预后提供候选标记物。
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