摘要
辣椒炭疽病是辣椒生产上的重要真菌病害，危害严重时导致辣椒减产40%-60%。我国危害辣椒炭疽病菌存在明显遗传多样性。检测分析表明我国各个辣椒产区田间复合侵染比较普遍，但是优势种均为胶孢炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)但是C.gloeosporioides种内是否存在遗传多性和致病力差异、是否与寄主偏好性相关联，目前未见相关报道；另外，目前辣椒炭疽病菌防控以化学防控为主，但由于不科学和不合理的施用，容易使炭疽病病原菌产生耐药性或者抗药性，因此提高现有杀菌剂的防治效果，增强对目标病原菌的敏感性，延缓耐药性或者抗药性等显得十分迫切。本研究以C.gloeosporioides为研究对象，开展C.gloeosporioides种内SSR标记研究；结合离子液体的可设计性，以杀菌剂抑霉唑作为模式药物，探索辣椒炭疽病原菌对抑霉唑及其离子化衍生物的敏感性差异等。具体结果如下： 1.建立了C.gloeosporioides种内的SSR标记体系。成功筛选获得7对特异性引物，能够有效区分辣椒不同炭疽病菌和不同寄主来源的胶孢炭疽病菌。遗传聚类分析表明：侵染辣椒的55株C.gloeosporioides分成5个group，其中3个group表现出明显的遗传多样性，部分表现出一定的地域分布特征。以C.gloeosporioides-CSLL11为对照菌株，证实了10株SSR-PCR差异菌株在生长速率、菌落形态、产孢量、分生孢子大小以及致病力等方面存在明显差异。 2.以杀菌剂抑霉唑为母体，成功制备了抑霉唑-醋酸、抑霉唑-壬酸、抑霉唑-油酸、抑霉唑-苯甲酸、抑霉唑-水杨酸和抑霉唑-烟酸6种离子化衍生物，回收产率为89%-98%；结构表征分析表明：合成产物离子液咪唑环上N-CH-N氢谱位移向高场分别移动了约0.1ppm-0.4ppm，且所有配对离子中位于高场的羧基的活泼氢均消失。 3.明确了5种辣椒炭疽病菌HHBY48(C.acutatum )，YYGXZ07(C.brevisporum)，HBLF01(C. capsici )、CZHP03(C.truncatum)，CSLL11(C.gloeosporioides )对抑霉唑的EC50值为2.85mg/L~176.34mg/L，其中C.truncatum与C.acutatum之间相差62倍。以抑霉唑为对照，明确了C.gloeosporioides-CSLL11对6种抑霉唑离子化衍生物的敏感性存在差异，其中醋酸、壬酸、油酸及水杨酸为阴离子配体离子化衍生物的敏感性比抑霉唑提高了29%-47%；2种抑霉唑离子化衍生物对稻瘟病菌和镰刀菌敏感性均有所提高，但是对卵菌没有效果，推测抑霉唑离子液没有扩大杀菌谱。 4.采用PEG-CaCl2介导的原生质体转化法，成功建立了C.gloeosporioides遗传转化体系，Southernblot确认eGFP以单拷贝形式整合到转化子基因组中并稳定表达，其转化子和后代均发出较强的绿色荧光信号；转化子与野生型菌株在菌落形态、生长速率、产孢量、分生孢子大小及致病力方面没有明显差异。
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