摘要
目的: 糖尿病(Diabetes mellitus, DM)是由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱性疾病，已成为仅次于肿瘤、心脑血管疾病，严重威胁人类健康的世界第三大疾病。糖尿病随着病程的迁延可以引起多系统损害，导致组织病变和功能异常，严重影响着糖尿病病人的生活质量。目前对Ghrelin和Obestatin在糖尿病大鼠中的作用多集中在外周消化系统和对血糖水平的调控上。至今鲜有文献报道中枢Ghrelin和Obestatin对糖尿病大鼠的摄食及胃运动有怎样的调节功能？Ghrelin和Obestatin又是通过何种机制影响糖尿病大鼠的胃运动的？尤其是海马-下丘脑Obestatin/Ghrelin神经通路在糖尿病大鼠有何改变，此种改变在糖尿病早期摄食和胃运动功能紊乱中起着怎样的作用？本研究将通过中枢核团定位给药，清醒大鼠胃运动记录，胃排空以及荧光逆行追踪，电生理等手段，探讨以上问题。 方法： 制备糖尿病大鼠模型：300只大鼠适应性饲养一周后，腹腔注射65mg/kg链脲佐菌素，72h后取尾静脉血测空腹血糖，空腹血糖高于7.0mmol/L和餐后血糖高于11.1mmol/L为糖尿病大鼠建模成功，共制备糖尿病大鼠260只，造模失败大鼠弃去不用；PCR检测正常及糖尿病大鼠海马/弓状核(ARC)Ghrelin/ObestatinmRNA表达；采用荧光金逆行追踪结合荧光免疫组化技术，观察正常、糖尿病大鼠海马-ARCGhrelin神经通路及ARC-海马Obestatin神经通路；单细胞外放电记录，观察ARC微量注射Ghrelin对胃牵张(GD)神经元放电活动的影响，以及海马微量注射Obestatin对GD神经元放电活动的影响；采用核团微量注射药物、在体胃运动测定、摄食研究及胃排空等方法，观察海马-ARC通路中Ghrelin/Obestatin对大鼠胃运动、胃排空及摄食的影响及潜在机制。 结果： PCR研究结果显示，与正常大鼠相比，糖尿病大鼠海马GhrelinmRNA表达显著增加，而ARC内ObestatinmRNA表达量显著下降；荧光金逆行示踪结合荧光免疫组化结果显示，海马内部分Ghrelin免疫阳性神经元可发出神经纤维投射至ARC，与正常大鼠相比，糖尿病大鼠海马FG/Ghrelin双标神经元数目显著增加，同时研究还发现，ARC内部分Obestatin免疫阳性神经元可发出神经纤维投射至海马，且与正常大鼠相比，糖尿病大鼠海马FG/Obestatin双标神经元数目显著减少；Ghrelin能够兴奋ARC内GD-E神经元，抑制GD-I神经元，Ghrelin对ARC内GD神经元的兴奋或抑制效应可被Ghrelin受体阻断剂Des-Lys-3-GHRP6完全阻断，Obestatin能够抑制海马内GD神经元放电活动，并且Obestatin对GD神经元活性的抑制效应可被促肾上腺皮质激素释放因子受体1(CRFR1受体)阻断剂NBI27914部分阻断；Ghrelin能够剂量依赖性的促进大鼠胃运动、摄食及胃排空，Ghrelin受体拮抗剂Des-Lys-3-GHRP6，可完全阻断Ghrelin对大鼠胃运动、摄食及胃排空的促进作用；Obestatin可剂量依赖性的抑制大鼠胃运动、摄食及胃排空，NBI27914可部分阻断Obestatin对大鼠胃运动、摄食及胃排空的抑制作用；与正常大鼠相比，Ghrelin对糖尿病大鼠ARC内GD神经元的作用以及对胃运动、摄食和胃排空的促进效应显著增强，而Obestatin对糖尿病大鼠海马内GD神经元的抑制效应以及对胃运动、摄食和胃排空的抑制效应显著减弱。 结论： 海马-ARC之间存在Ghrelin神经和功能通路，ARC-海马之间存在Obestatin神经和功能通路；这两条通路可调控大鼠胃运动、胃排空及摄食；早期糖尿病大鼠海马-ARCGhrelin神经通路功能增强而ARC-海马Obestatin神经通路功能减弱参与了糖尿病患者早期多食，胃动力增强的发生机制；GHS-R和CRFR1受体分别介导了Ghrelin和Obestatin的作用。
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