摘要
病毒广泛存在于自然界中，颗粒微小，无完整细胞结构，具有高度的寄生性。病毒必须利用宿主细胞的能量代谢系统和蛋白质翻译系统才能实现自我复制，并不断进化出一系列免疫逃逸机制。宿主在与病毒等病原体的长期“斗争”中，也出现了高度复杂和精细的抗病毒感染的免疫系统，从而及时有效地清除外来病原体。 DEAD-box(DDX)家族是一类以D(Asp)-E(Glu)-A(Ala)-D(Asp)为保守序列的RNA解旋酶，主要参与RNA代谢过程，包括RNA的剪接、转录、转运、翻译、降解等。此外，一些DDX家族成员已被发现在抗病毒免疫方面发挥着非常重要的功能，比如DDX41和DDX58(RIG-Ⅰ)，分别识别病毒的DNA和RNA，进一步诱导Ⅰ型干扰素β(IFN-β)的产生。我们先前利用DDX家族的RNAi文库筛选发现，DDX20具有抗病毒活性。进一步研究发现敲低DDX20能够促进水疱性口炎病毒(VSV)和Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)等病毒的复制;而过表达DDX20，则明显降低了这些病毒的复制水平。此外，我们利用构建的DDX20敲除小鼠，发现DDX20在小鼠体内也具有抗病毒作用。 为了探索DDX20的抗病毒作用机制，我们首先检测了DDX20对抗病毒天然免疫的影响。结果显示，DDX20能够增强Ⅰ型干扰素β(IFN-β)的表达，从而有效促进了Cig5、IFIT1等干扰素刺激基因(ISG)的表达。进一步分析发现，DDX20通过协助TBK1和IRF3相互作用，进一步增强了外界刺激诱发的IRF3的磷酸化水平，从而促进了IFN-β的表达。 我们利用免疫沉淀结合质谱分析方法(IP-MS)找到一个DDX20相互作用蛋白LRSAM1。作为一个E3泛素连接酶，LRSAM1能够促进DDX20的泛素化水平，并进一步增强了DDX20介导的IRF3的磷酸化。通过本课题的研究，我们发现了DDX20具有抗病毒作用，并初步阐明了其抗病毒分子机制，为进一步分析宿主的天然免疫调控机制奠定基础，也为抗病毒药物的研发提供新的靶点。
NETL