摘要
研究背景: 寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)是一种新型蚊媒传播病毒，可以通过蚊虫叮咬，性传播和输血传播，对输血安全有潜在威胁。由于ZIKV的致病机制尚不完全清楚，目前尚无特异性的抗病毒药物和疫苗。因此，深入研究ZIKV感染对宿主基因表达的影响，以及这些基因在病毒复制调节中的作用，具有重要的意义。我们采用RNAseq对ZIKV感染前后的细胞中，宿主基因表达进行了检测，结果显示，ZIKV感染后干扰素刺激基因OAS2表达水平显著升高。有研究表明，OAS家族基因对丙型肝炎病毒(HCV)及登革病毒(DENV)等黄病毒复制具有显著的抑制作用。但是，OAS2对ZIKV的复制是否具有抑制作用及其调控的机制，目前尚不清楚。 研究目的: 1.阐明ZIKV感染对OAS2表达的影响及其机制研究; 2.阐明OAS2对ZIKV复制的影响及其机制研究。 研究内容: 1.ZIKV感染对OAS2表达的影响; 2.ZIKV感染诱导OAS2高表达的机制研究; 3.OAS2对ZIKV复制的影响; 4.OAS2通过激活Ⅰ型干扰素信号通路抑制ZIKV复制的机制研究。 研究方法: 1.ZIKV感染A549，Huh7.0，Huh7.5.1，U5A和2fTGH细胞，检测病毒感染前后OAS2表达;通过比较Huh7.0与Huh7.5.1细胞感染ZIKV后OAS2表达的变化，探宄ZIKV诱导OAS2高表达是否通过RIG-I介导的通路;通过对比U5A和2fTGH细胞感染ZIKV后OAS2表达的改变，探究ZIKV诱导OAS2高表达是否通过I型干扰素介导的通路; 2.ZIKV感染A549细胞，高表达OAS2，检测OAS2对ZIKV复制以及对IFNβ抗病毒活性的影响; 3.ZIKV感染A549细胞，高表达OAS2，检测OAS2对Ⅰ型干扰素及其上游RIG-I通路的影响; 4.ZIKV感染A549细胞，高表达OAS2，通过WesternBlot检测信号转导和转录因子(STAT1)磷酸化;通过双荧光报告实验检测干扰素刺激反应原件(ISRE)的活性;通过qRT-PCR检测ISGs的表达情况; 5.ZIKV感染A549，U5A，2fTGH以及敲低RIG-I的A549细胞，高表达OAS2，检测OAS2对ZIKV复制的影响是否依赖于Ⅰ型干扰素信号通路。 研究结果: 1.ZIKV感染A549细胞，细胞内OAS2的表达水平显著升高;将A549细胞中RIG-I敲低后，ZIKV诱导的OAS2显著降低;高表达RIG-I的A549细胞中，ZIKV诱导的OAS2显著增加; 2.在RIG-I受体缺陷的Huh7.5.1细胞中，OAS2的表达降低;将RIG-I高表达后，OAS2的表达升高。ZIKV感染2fTGH和U5A细胞，OAS2在两种细胞中均能表达，但是，OAS2在2fTGH细胞中的表达水平显著高于U5A细胞; 3.感染ZIKV的A549和2fTGH细胞中，OAS2高表达显著抑制ZIKV复制，并且增强IFNβ的抗病毒活性。但是在干扰素受体缺陷的U5A细胞中，OAS2高表达对ZIKV复制无影响; 4.OAS2高表达激活RIG-I通路促进IFNβ的产生; 5.OAS2高表达激活了Jak/STAT信号通路，促进STATI水平的磷酸化，增强ISRE的活性，诱导其它ISGs的表达; 6.敲低A549细胞中的RIG-I，高表达OAS2对ZIKV复制无影响。 研究结论: OAS2在ZIKV复制中起着重要的调节作用。ZIKV感染后通过RIG-I依赖的通路诱导OAS2高表达，且这种诱导作用不完全依赖于Ⅰ型干扰素信号通路;OAS2高表达通过促进IFNβ产生以及激活Ⅰ型干扰素信号通路抑制ZIKV复制且增强IFNβ的抗病毒活性。
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