摘要
背景： 动脉粥样硬化是血管内皮损伤后的一种慢性的渐进的疾病，近几年的发病趋势呈低龄化。动脉粥样硬化常伴有钙化，是动脉粥样硬化的标志之一也是其必然结果，最近的观点认为动脉粥样硬化钙化是一个主动的过程而不仅仅是钙盐结晶简单的被动沉积。Sca-1、c-Kit作为干细胞的表面标记之一，广泛应用到心血管疾病的研究中。探索动脉粥样硬化伴钙化动脉Sca-1、c-Kit的表达改变可能会对动脉粥样硬化伴钙化的治疗提供新的思路。 目的： 探讨Sca-1阳性细胞、c-Kit阳性细胞在冠状动脉粥样硬化钙化模型大鼠动脉壁中的表达与分布，为进一步研究冠状动脉粥样硬化奠定细胞学基础。 方法： 1.32只健康成年SD大鼠，随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=24)。正常对照组大鼠采用常规饲料喂养，模型组大鼠采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆固醇饲料喂养以及维生素D3腹腔注射的方法制备。 2.从第7周开始，每周从正常组和模型组各随机选取1只大鼠，取出心脏，经OCT包埋，冰冻切片。通过油红O、茜素红、HE染色观察模型组大鼠冠状动脉的病理变化，以显示动脉粥样硬化钙化模型的制备情况。 3.模型制备成功后，通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察Sca-1、c-Kit在模型组与在正常组的大鼠血管组织中的表达变化。 4.通过免疫荧光染色技术观察Sca-1与α-SMA的共表达。 5.通过westernblotting技术检测模型组与正常组的大鼠c-Kit、Sca-1蛋白的表达差异。 结果： 1.造模12周末时，模型组大鼠冠状动脉管壁明显的增厚，内膜明显的增生，平滑肌纤维排列显著紊乱，出现坏死物质沉积、脂质沉积和钙结节沉淀。提示动脉粥样硬化钙化模型制备成功。 2.免疫组化结果显示Sca-1+细胞、c-Kit+细胞在动脉粥样硬化钙化大鼠模型的冠状动脉内膜、中膜、外膜中的表达明显高于正常对照。 3.免疫荧光结果显示Sca-1+细胞、c-Kit+细胞在动脉粥样硬化钙化大鼠模型的冠状动脉表达与免疫组化结果一致，在部分细胞中存在Sca-1与α-SMA的共表达。 4.westernblotting结果显示动脉粥样硬化钙化模型组大鼠的c-Kit、Sca-1蛋白的表达量高于正常对照组。 结论： Sca-1+细胞、c-Kit+细胞在冠状动脉粥样硬化钙化状态下数量增多，其机制尚需研究。
NETL