摘要
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人畜共患病原菌，能够引起菌血症、中毒性休克综合征、心内膜炎、骨髓炎和肺炎等多种疾病。自20世纪60年代以来，随着耐药性金黄色葡萄球菌菌株的出现，给金葡菌治疗带来了严峻的挑战。疫苗接种是预防或治疗S.aureus感染的有效手段之一，然而目前尚无安全有效S.aureus疫苗问世。因此，开发能够预防S.aureus感染的疫苗迫在眉睫。本研究选取S.aureus表面蛋白TraP、Efb、Csa1、Rap、MntC、GapC、FhuD2作为候选抗原，分别构建上述抗原重组表达载体，诱导表达并纯化目的蛋白。将目的蛋白配伍弗氏佐剂分别免疫小鼠，ELISA法检测小鼠血清中的抗体水平。在末次免疫后，将金葡菌通过滴鼻的方式进行攻毒，检测各组小鼠的体温变化、肺脏病理变化、肺部载菌量及存活率，明确各蛋白的免疫保护效果。 结果表明，成功构建TraP、Efb、Csa1、Rap、MntC、GapC、FhuD2蛋白的重组表达载体，经诱导表达纯化，获得纯蛋白。与PBS对照组相比较，TraP、Efb、Csa1、Rap、MntC、GapC、FhuD2抗原都能显著提高小鼠血清中特异性IgG抗体滴度；在攻毒实验中，TraP、Csa1、Rap、MntC、GapC抗原能够提高小鼠对金葡菌的抵抗能力，各组小鼠存活率如下：TraP为80%、Efb为20%、Csa1为80%、Rap为60%、Mntc为80%、Gapc为60%、FhuD2为30%。接下来选取免疫保护效果为80%以上的抗原作为候选抗原(TraP、Csa1、Mntc)，将上述三种抗原等比例混合后配伍乳酸菌多糖佐剂EPS29、EPS30，制备成多抗原混合疫苗，并分别对小鼠进行免疫，ELISA法检测小鼠血清中的特异性抗体及其亚型水平。末次免疫后，将金葡菌通过滴鼻的方式进行攻毒，检测各组小鼠体温变化、肺脏病理变化、肺部载菌量及存活率。结果发现：与PBS组、EPS29组、EPS30组、TraP+Csa1+Mntc组相比较，TraP+Csa1+Mntc+CFA/IFA、TraP+Csa1+Mntc+EPS29、TraP+Csa1+Mntc+EPS30免疫组能够提高小鼠对金葡菌的抵抗能力，并且能够减少金葡菌在肺部的定植；TraP+Csa1+Mntc+CFA/IFA、TraP+Csa1+Mntc+EPS29、TraP+Csa1+Mntc+EPS030免疫组均能显著提高小鼠血清中特异性IgG抗体以及IgG抗体亚类IgG1、IgG2a和IgG2b的抗体滴度；同时能够促进细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-17的分泌。 本研究为研发S.aureus新型基因工程疫苗提供理论依据和实验数据。
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