摘要
背景和目的： 目前，全球约有8亿人受慢性肝病的影响，慢性肝病已成为全球公共卫生关注的主要问题之一，进展性肝纤维化常常导致肝硬化，这与全世界的高发病率和死亡率密切相关。值得注意的是，各种病因导致的慢性肝病其病理均涉及慢性实质损伤、炎症反应、肝纤维化和创面愈合反应的持续激活，其中肝纤维化最为重要，因而肝纤维化也成为各种慢性肝病的重要病理特征，其机制涉及多个信号通路，主要病理改变为肝内弥漫性细胞外基质过度沉积，引起细胞外基质降解失衡，其发生机制中，肝星状细胞首先激活并增殖，产生大量细胞外基质。大量研究证实，多种细胞因子能够激活肝星状细胞，血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是肝星状细胞中有效的有丝分裂增殖细胞因子之一,对肝星状细胞的增殖、迁移、趋化等发挥关键作用。褪黑素是一种天然的抗氧剂，现已证实，其对多种肝纤维化具有保护作用，但作用机制尚不清楚。本文旨在讨论褪黑素对肝星状细胞活化的影响及机制。 方法： 本实验用浓度梯度为1nmol/L、1μmol/L、0.1mmol/L的褪黑素探讨其对PDGF(10ng/ml)诱导的大鼠HSC-T6细胞活化的影响，细胞培养24h后按照以下方法分6组： （1）对照组：加入PBS （2）模型组：10ng/ml的PDGF。 （3）褪黑素低浓度组：10ng/ml的PDGF和等体积的1nmol/L的褪黑素 （4）褪黑素中浓度组：10ng/ml的PDGF和等体积的1umol/L的褪黑素 （5）褪黑素高浓度组：10ng/ml的PDGF和等体积的0.1mmol/L的褪黑素 （6）抑制剂组：10ng/ml的PDGF和等体积的AG490。 孵育48h后，MTT检测各组细胞的增殖情况，免疫组化和Western Blot检测各组P-JAK2、P-STAT3蛋白。 结果： 1.MTT实验结果显示，模型组OD值较对照组显著增加（P<0.01）；褪黑素低、中、高浓度组及抑制剂组的OD值较模型组呈下降趋势（P<0.01），且随着褪黑素浓度升高下降趋势越明显。 2.细胞免疫组化实验结果显示，P-JAK2蛋白主要在胞质中表达，而P-STAT3蛋白主要在胞核中表达。与对照组比较，模型组中P-JAK2、P-STAT3蛋白表达明显增加（P<0.01）；与模型组比较，褪黑素各剂量组及抑制剂组P-JAK2、P-STAT3蛋白表达明显减少（P<0.05），且褪黑素浓度越高，细胞中P-JAK2、P-STAT3表达量越低。 3.Western Blot实验结果显示，与对照组比较，模型组HSC-T6细胞中P-JAK2、P-STAT3蛋白的表达增强（P<0.01）；与模型组比较，褪黑素低、中、高剂量组及抑制剂组P-JAK2、P-STAT3蛋白表达水平降低（P<0.05），并随褪黑素浓度升高蛋白表达量逐渐下降。 结论： 褪黑素可抑制PDGF诱导的肝星状细胞活化，其效应与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。
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