摘要
目的：通过观察商陆皂苷甲（EsA）对MRL/lpr小鼠体内CD19+IL-35+Breg细胞、IL-35等细胞因子表达的影响，探究EsA对狼疮性肾炎可能的治疗机制。 方法：选取24只SPF级MRL/lpr小鼠（雌性、已发病），随机分为模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组，每日通过腹腔注射分别给药，每组分别给药4周。4周后收集小鼠血液标本并处死小鼠，收集肾组织、脾脏组织。称小鼠体重和脾脏重量计算脾脏指数；HE染色、Masson+PASM染色观察肾脏病理变化，并进行狼疮性肾炎活动性指数（acute index,AI）评分；酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清IL-10、IL-17、IL-35表达水平；流式细胞术检测脾脏CD19+IL-35+Breg细胞比例；数据采用SPSS21.0行统计学分析，P≤0.05认为有统计学意义。 结果：1.一般情况：用药前各实验组MRL/lpr小鼠摄食、活动正常，毛发正常；随着实验进行，对照组、EsA+IL-12p35抗体组小鼠逐渐出现精神疲倦，摄食、活动减少，呼吸急促、毛发脱落、斑秃样皮肤损伤伴结痂形成。EsA治疗组摄食、活动较前无明显改变，仅毛发较前稀疏，光泽度较前下降。 2.脾脏指数：模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠脾脏指数分别为228.12±11.8mg/g、191.69±10.75mg/g、134.47±7.64mg/g，三组两两比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 3.肾脏病理：光学显微镜下观察模型对照组MRL/lpr小鼠病理表现为：肾小球系膜细胞、内皮细胞重度弥漫性增生，肾小球内可见大量免疫复合物沉积，细胞纤维性新月体、环状体形成；肾间质可见弥漫性淋巴细胞和单核细胞浸润。EsA+IL-12p35抗体组小鼠肾组织病理表现：肾小球系膜细胞、内皮细胞中-重度增生，肾小球内可见大量免疫复合物沉积，少见新月体、环状体形成；肾间质弥漫性淋巴细胞和单核细胞浸润。EsA组肾脏病理表现为：肾小球系膜细胞、内皮细胞轻度增生，肾小球内可见免疫复合物沉积，少见新月体形成；肾间质局灶性淋巴细胞和单核细胞浸润。采用Austin评分系统对各组小鼠肾脏狼疮活动性指数进行评分，模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠AI指数分别为：10.25±1.22、8.38±0.79、4.81±1.07，三组两两比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 4.MRL/lpr小鼠脾脏中CD19+IL-35+Breg细胞比例：模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠脾脏中CD19+IL-35+Breg细胞比例分别为：0.13±0.05%、0.35±0.16%、1.19±0.30%，三组两两比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 5.MRL/lpr小鼠血清中IL-10、IL-35、IL-17水平：模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠血清中IL-10水平分别为：63.30±12.83pg/ml、101.34±21.67pg/ml、137.40±22.86pg/ml，三组两两比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠血清中IL-35水平分别为：116.04±13.86pg/ml、129.56±12.22pg/ml、141.96±5.83pg/ml，三组两两比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。模型对照组、EsA+IL-12p35抗体组、EsA治疗组MRL/lpr小鼠血清中IL-17水平分别为：17.90±1.89pg/ml、14.70±1.81pg/ml、12.54±0.94pg/ml，三组两两比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 6.Pearson相关及直线回归分析：MRL/lpr小鼠血清中IL-35水平与IL-10水平呈正相关(r=0.906，P＜0.05)；MRL/lpr小鼠血清中IL-35水平与CD19+IL-35+Breg细胞比例呈正相关(r=0.667，P＜0.05)；MRL/lpr小鼠血清中IL-35水平与IL-17水平呈负相关(r=-0.954，P＜0.05)。对MRL/lpr小鼠血清中IL-35与IL-10、IL-17、CD19+IL-35+Breg做直线回归分析，MRL/lpr小鼠外周血IL-35（X）与IL-10（Y1）之间回归方程为Y1=-177.75+2.2X，具有统计学意义（P＜0.05）；小鼠外周血IL-35（X）与IL-17（Y2）之间回归方程为Y2=37.14-0.17X，具有统计学意义（P＜0.05）；小鼠外周血IL-35的表达水平与CD19+IL-35+Breg细胞比例之间回归方程为Y3=-2.3+0.02X，具有统计学意义（P＜0.05）。 结论：1.EsA可以降低自发性系统性红斑狼疮模型小鼠AI指数、脾脏指数，对狼疮模型小鼠有一定的治疗效果。2.EsA对MRL/lpr小鼠治疗作用可能与其通过促进CD19+IL-35+Breg细胞增殖产生IL-35,从而下调IL-17有关。
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